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慢病毒包裝分子實驗特點:
1. 直接包裝成為假病毒顆粒,,對分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用,適合RNAi研究和體內(nèi)實驗中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞,、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞),。
2. 可以通過簡單方式,在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株,。
3. 可用于基因敲除,、基因治療和轉(zhuǎn)基因動物研究。
4. 無需轉(zhuǎn)染試劑,,操作簡便,。
5.可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。
原理:
慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體,,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比,一方面可以擴(kuò)增替代瞬時表達(dá)載體使用,,另一方面,,Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞,,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,,進(jìn)行長時間的穩(wěn)定表達(dá)。
慢病毒包裝分子實驗流程:
1. 含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取,。
注:客戶也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達(dá)載體,。
2. 慢病毒表達(dá)載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞。
3. 收集病毒液,。
4. 純化和濃縮病毒,。
5. 分裝、- 80 oC保存,。
6. 滴度測定及無菌檢測,。
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