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SILAC

背景簡介：

    SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技術(shù)是依據(jù)細(xì)胞生長對(duì)必需氨基酸的依賴原理，利用穩(wěn)定同位素標(biāo)記( 13C,，15N,，2H)的必需氨基酸對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)組進(jìn)行代謝標(biāo)記的方法；13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素,，沒有放射性,，因此可以在常規(guī)條件下進(jìn)行試驗(yàn)。

    Arg(R),、Lys(K),、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C,，15N,，2H)等穩(wěn)定同位素標(biāo)記的R、K,、L加入細(xì)胞培養(yǎng)基中,，在細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)合成時(shí)，這些穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質(zhì)中,。通過>6代的細(xì)胞增殖,，整個(gè)細(xì)胞的蛋白質(zhì)組會(huì)被 

穩(wěn)定同位素氨基酸”標(biāo)記”；

     SILAC“標(biāo)記”了蛋白質(zhì)與“未標(biāo)記”的蛋白質(zhì)（普通培養(yǎng)基培養(yǎng)）存在數(shù)目的質(zhì)量差異,，該質(zhì)量差異在后續(xù)LC-MS的質(zhì)譜( MSl)中呈現(xiàn)一對(duì)同位素質(zhì)譜峰,，通過質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)度能實(shí)現(xiàn)對(duì)2組樣品中每一個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的定量,，終能確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平差異（差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析）和區(qū)分特異性和非特異性相互作用（蛋白質(zhì)相互作用分析）；同時(shí)通過質(zhì)譜( MS/MS,，MS2)實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中蛋白質(zhì)的鑒定,。

     SILAC技術(shù)結(jié)合LC-MS能同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)2組樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質(zhì)表達(dá)水平差異,，便于快速找到感興趣的目標(biāo)分子,。同時(shí)，利用SILAC技術(shù),，能明顯提高文章的

檔次,。

SILAC氨基酸對(duì)照表：

SILAC實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：