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復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品的高效分離是提高M(jìn)S對(duì)蛋白質(zhì)鑒定覆蓋度的重要因素,。2D-Gel技術(shù)是依據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)（iso-electric point）和分子量的差異,，通過(guò)等電聚焦（IEF）和SDS-PAGE的二維分離，不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)以點(diǎn)狀的形式（spot）分布在凝膠上,；

樣品通過(guò)2D-Gel分離后,，每個(gè)點(diǎn)上的蛋白質(zhì)復(fù)雜度急劇降低。因此,，凝膠上的蛋白質(zhì)酶解后,，不需要再進(jìn)行LC分離，可以直接進(jìn)行MALDI-TOF MS分析,，從而縮短實(shí)驗(yàn)周期和降低MS測(cè)試費(fèi)用,；

2D-Gel技術(shù)的蛋白質(zhì)樣品（細(xì)胞,、組織、體液等）,；

2D-Gel結(jié)合MALDI-TOF MS,，主要用于差異蛋白質(zhì)組分析。

技術(shù)路線(xiàn)：

實(shí)驗(yàn)流程：

1.蛋白質(zhì)提取及定量,；

2.蛋白質(zhì)分別進(jìn)行2D-Gel電泳及染色,；

3.掃描圖片，用軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析,，尋找差異點(diǎn),；

4.切割差異點(diǎn)，Trypsin酶解,，提取肽段,，MALDI-TOF MS完成蛋白質(zhì)鑒定；

5.數(shù)據(jù)篩選,，挑選蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證（Western blot等）,。