克隆形成試驗是測定細胞增殖能力的有效方法之一,，貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞,。細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量，可以反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀,。

1.取對數(shù)生長期的各組細胞,，分別用0.25%ydbm消化并吹打成單個細胞，并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用,。

2.將細胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,，每組細胞分別以每皿50、100,、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,，并輕輕轉(zhuǎn)動，使細胞分散均勻,。置37℃ 5%CO₂及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2——3周,。

3.經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,，終止培養(yǎng),。棄去上清液,，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘,。然后去固定液,，加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10——30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液,，空氣干燥,。

4. 將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,，用肉眼直接計數(shù)克隆,，或在顯微鏡（低倍鏡）計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù)。最后計算克隆形成率,。