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RT-PCR

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更新時間:2024-03-14 11:46:18瀏覽次數(shù):521次

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RTPCR,反轉(zhuǎn)錄·聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(reverse transcription )和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù),。

首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,,再以cDNA為模板,,擴增合成目的片段。RT-PCR%E6%8A%80%E6%9C%AF/176650?fromModule=lemma_inlink">RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛,,可用于檢測細胞基因表達水平,,細胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列,。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA體外轉(zhuǎn)錄RNA產(chǎn)物,。無論使用何種RNA,,關(guān)鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組 DNA的污染。

提取組織或細胞中的總RNA,,以其中的mRNA作為模板,,采用Oligo(dT)或隨機引物利用反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增,,而獲得目的基因或檢測基因表達,。


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