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甲基化檢測

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更新時間:2024-06-17 13:37:17瀏覽次數(shù):529次

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甲基化檢測 DNA甲基化是最早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,,真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉變?yōu)?’-甲基胞嘧啶,。DNA甲基化通常抑制基因表達,,去甲基化則誘導了基因的重新活化和表達。這種DNA修飾方式在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調控,。

1.甲基化特異性PCRMethylation-specific PCR,,MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為nmd,,而甲基化的胞嘧啶不變,;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產物,,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,,則說明該位點存在甲基化;反之,,說明被檢測的位點不存在甲基化,。

2.亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為nmd,,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR,,在擴增過程中nmd全部轉化為胸腺嘧啶,,最后對PCR產物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產物克隆至載體后進行測序,,可以提高測序成功率,,這種方法稱為BSP-克隆測序法。



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