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動物組織勻漿制備實驗

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更新時間:2024-11-22 14:03:57瀏覽次數(shù):1009次

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動物組織勻漿制備實驗是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一,,由經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成,。

1,、取組織塊(0.2g 1g)少可到2~5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗,,除去血液,,濾紙拭干,,稱
重,,放入5或10m1的小燒杯內(nèi)
2,、用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)或者用0. 86%冷生理鹽水,,勻漿1 )質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿^質(zhì)或生理鹽水于燒杯中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。

3,、勻漿的方式有多種:手工勻漿,、機器勻漿、超聲勻漿,、反復(fù)凍融,。
手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,,右手將搗桿垂直插入套管中,,上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(6~8分鐘) ,充分研碎,使組織勻漿化,。
機器勻漿:用組織搗碎機10000~ 15000r /min上下研磨制成10%組織勻漿,,也可用內(nèi)切式組織勻漿
機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行) ,皮膚,、肌肉組織等可延長勻漿時間。
超聲粉碎:用超聲粉碎機進(jìn)行粉碎,,可用Soniprep150型超聲 波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒
使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,,用40安培,5秒/次,,間隙10秒反復(fù)3~5次,。反復(fù)凍融:培養(yǎng)或者分離的細(xì)胞可以用以上的方法勻漿,也可以反復(fù)凍溶3次左右(即讓細(xì)胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結(jié)冰,,溶解,,再結(jié)冰,再溶解,,反復(fù)3次左右) ,但有部分酶活力會受影響,。取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可),,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破,,若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數(shù)。
4,、將制備好的10%勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r /min左右離心10~15分鐘,,若檢測
ATP酶,則只需要1000轉(zhuǎn)/分,,離心5分鐘,,將離心好的勻漿留下,上清棄下面沉淀。



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