蛋白組學服務(wù)

 蛋白組學服務(wù)iTRAQ的4種同位素標記試劑由４種相對分子質(zhì)量分別為114、115,、116和117的報告基團(reportergroup),，相對分子質(zhì)量分別為31、30,、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(balancegroup)以及一個相同的肽反應標記試劑基團(peptide reactivegroup)組成,。不同的報告基團分別與相應的平衡基團相配后，相對分子質(zhì)量均為145,，即等量異位標簽(isobaric tag),。
 將蛋白質(zhì)裂解為肽段，然后用iTRAQ試劑進行差異標記,。由于iTRAQ試劑是等量的,，即不同同位素在標記同一多肽后在*級質(zhì)譜檢測，分子量相同,，用串聯(lián)質(zhì)譜方法對在*級質(zhì)譜檢測到前體離子(precursorion)進行碰撞誘導解離,，產(chǎn)物離子通過第二級質(zhì)譜進行分析。在二級質(zhì)譜分析過程中,，報告基團,、質(zhì)量平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，質(zhì)量平衡基團丟失,，產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報告離子,。由于二級質(zhì)譜可分析相對分子質(zhì)量相差1的報告基團，不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對豐度,。同時,，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂，形成一系列b離子和y 離子,，得到離子片段的質(zhì)量數(shù),，通過數(shù)據(jù)庫查詢和比較，可以鑒定出相應的蛋白質(zhì)前體.

技術(shù)特點:
1．可同時標記2~8 個樣本,。
2. iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白,，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白,。iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白,、強堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白,。
3.可標記修飾后的氨基酸,，因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質(zhì)量較低(113~121),，低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準確的區(qū)域,，因此質(zhì)譜檢測更為靈敏可靠。