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大鼠卵母細(xì)胞的采集及發(fā)育分型

時間:2025/4/3閱讀:72
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  大鼠超排可以用于研究環(huán)境污染物或藥物對生殖系統(tǒng)的毒性影響,;通過誘導(dǎo)超排并觀察卵母細(xì)胞和胚胎的發(fā)育情況,可以評估潛在的生殖毒性,。大鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育過程可以分為3個階段:GV期,、MI期、MⅡ期,。
 
  方法
 
  1.雌性SD大鼠,腹腔注射PMSG 60IU,,注射PMSG 46-48h后,,腹腔注射hCG 20IU,誘導(dǎo)超排,。
 
  2.準(zhǔn)備卵母細(xì)胞培養(yǎng)滴:在60mm培養(yǎng)皿內(nèi)做若干水滴狀的滴,,并用礦物油覆蓋,放入培養(yǎng)箱(37 ℃,、5%CO2)平衡4h以上(推薦過夜平衡),。
 
  3.卵母細(xì)胞采集的時間通常在SD大鼠注射hCG后13-16h內(nèi)進(jìn)行。
 
  4.雌性SD大鼠背部,、腹側(cè)備皮,,酒精消毒背側(cè)、腹側(cè)皮膚,。在距離大鼠脊柱1cm,、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,,可見白色的脂肪組織,,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,,摘除卵巢及輸卵管,,將其放入500μL的KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。
 
  5.在體式顯微鏡下觀察到輸卵管的上部(壺腹部)有一個明顯的膨大處,。用鑷子固定輸卵管,,用一根1 ml注射器縱向撕開壺腹部,用此法將其整個撕裂,,卵團(tuán)會游離到KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中,。
 
  6.在KSOM胚胎培養(yǎng)液中再加入同體積的透明質(zhì)酸酶溶液(0.6mg/mL),用移液槍輕輕吹打幾下,放入CO2培養(yǎng)箱中,,1分鐘后取出,。
 
  7.在顯微鏡下用移卵管收集卵母細(xì)胞到卵母細(xì)胞培養(yǎng)滴中,并用剩下的液滴逐步清洗,,清洗結(jié)束后放回37℃ CO2培養(yǎng)箱中,。
 
  8. GV期、MI期,、MⅡ期的卵母細(xì)胞,。
 
  GV:這是卵母細(xì)胞生長和發(fā)育的早期階段,卵母細(xì)胞處于減數(shù)分裂的第一次分裂前期,。
 
  MI:卵母細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂的第一次中期,。
 
  MⅡ期:這是卵母細(xì)胞成熟的最終階段,卵母細(xì)胞準(zhǔn)備好受精
 
  注意事項:
 
  大鼠的輸卵管不直接與卵巢相連,,而是緊貼卵巢表面,,呈彎彎曲曲的形狀。大鼠輸卵管可分為漏斗部,、壺腹部,、峽部和子宮部。
 

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