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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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3-4周齡雌性大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的原代培養(yǎng)

時(shí)間:2024/6/28閱讀:787
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1. 3-4周齡雌性SD大鼠,,皮下注射孕馬血清促性腺激素Pregnant Mare Serum Gonadotropin,,PMSG 60IU,,48h后頸椎脫臼處死。

2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中,。

3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開(kāi)皮膚,、肌肉,,可見(jiàn)白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,,可見(jiàn)到粉紅色的卵巢,,摘除卵巢。

4. 取卵巢放入預(yù)冷的含雙抗的緩沖液中,,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜,。

5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細(xì)胞,。

6. 將懸液通過(guò)70μm篩網(wǎng)過(guò)濾至50ml離心管中,,之后200g,離心7min,。

7. 計(jì)數(shù),,種植到24孔板和大皿中。

8. FSHR表達(dá)鑒定顆粒細(xì)胞,。

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