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來自結(jié)直腸癌的病人類器官原代培養(yǎng)

時間:2024/4/19閱讀:694
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一,、操作步驟

1.組織 4℃ 條件下從醫(yī)院取回,。
2.消毒取樣的 15ml 管,,取出組織,,放到 10ml 大皿中。
3.用含 4 抗的 PBS 溶液浸泡,,清洗組織,。
4.再用組織緩沖液浸泡,、清洗三遍。
5.將組織剪成 1mm3 大小的組織塊,,轉(zhuǎn)移到 15ml 管中消化,。
6.在 37℃ 水浴鍋中,消化 15min,。
7.取少量液體在顯微鏡下觀察,,看到較多的單細胞和較少的細胞簇后,終止消化,。
8.用 100μm 篩過濾,,然后 300g4℃ 離心 5min,移去上清,。
9.重懸沉淀,,轉(zhuǎn)移到 2ml 離心管中,,300g4℃ 離心 5min,,移去上清。
10.估算沉淀的細胞量,,以 1:25 的比例添加基質(zhì)膠,,重懸。
11.24 孔板鋪板,,冰上操作,,每孔點膠 25ul。
12.鋪板后,,放到 37℃ 細胞培養(yǎng)箱中 15min 成膠,。

13.然后每孔添加 600ul 結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基,放到 37℃ 細胞培養(yǎng)箱中,。


二,、結(jié)果展示

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