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液相色譜是一類(lèi)分離與分析技術(shù),，其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙,、薄板和填充床等,。在色譜技術(shù)發(fā)展的過(guò)程中．為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,，如紙色譜,、薄層色譜和柱液相色譜。
基本原理
高效液相色譜(HPLC),，是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,，于20世紀(jì)60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,。因?yàn)檩^小的填充顆粒具有高柱效,，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相,，故又稱(chēng)高壓液相色譜,。
使用高效液相色譜時(shí)，液體待檢測(cè)物被注入色譜柱,，通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),，由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,，通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào),，最后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,，廣泛地應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中,。高效液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別，它的特點(diǎn)是采用了高壓高靈敏度檢測(cè)器和高效微粒固定相,，適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā),、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物,。
高效液相色譜儀的構(gòu)造
圖3 高效液相色譜結(jié)構(gòu)示意圖高效液相色譜應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域,。
(1)分離混合物
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬,，固定相的種類(lèi)繁多,，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì),。
通過(guò)與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,，高效液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì),，能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分,。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對(duì)其的分離,。
(2)生化分析
由于高效液相色譜法具有高分辨率,、高靈敏度、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用,，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析,、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域，并已成為解決生化分析問(wèn)題最有前途的方法,。
(3)儀器聯(lián)用
高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向,。高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快,，如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類(lèi)等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展
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