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高通量藥物篩選的有力工具
在過(guò)去的二十多年里,，高通量篩選成為化藥開(kāi)發(fā)中小分子苗頭化合物發(fā)現(xiàn)的主力軍,。從靶點(diǎn)的早期發(fā)現(xiàn)到最終藥物的獲批上市，大約需要十五年到二十年的時(shí)間,。而高通量篩選作為一種確定成藥潛力化合物的高效率方式,，在現(xiàn)代小分子藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中起著非常重要的作用。
高通量篩選(High throughput screening,，HTS)技術(shù)是指以分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法為基礎(chǔ),，以微板形式作為實(shí)驗(yàn)工具載體，以自動(dòng)化操作系統(tǒng)執(zhí)行試驗(yàn)過(guò)程,，以靈敏快速的檢測(cè)儀器采集實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù),，以計(jì)算機(jī)分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在同一時(shí)間檢測(cè)數(shù)以千萬(wàn)的樣品,，并以得到的相應(yīng)數(shù)據(jù)庫(kù)支持運(yùn)轉(zhuǎn)的技術(shù)體系，它具有微量,、快速,、靈敏和準(zhǔn)確等特點(diǎn)。簡(jiǎn)言之就是可以通過(guò)一次實(shí)驗(yàn)獲得大量的信息,，并從中找到有價(jià)值的信息,。
目前通常采用的篩選方法大致可以分為生化篩選和細(xì)胞篩選兩大類(lèi)，基于小分子和靶點(diǎn)蛋白親和力的篩選方法屬于生化篩選,。
生化篩選方法在體外測(cè)定靶標(biāo)蛋白與配體的結(jié)合或酶活性的抑制,。這些分析通常采用競(jìng)爭(zhēng)形式進(jìn)行，即研究中的,。通常使用384孔板進(jìn)行檢測(cè),，一般采用20-50 μL的檢測(cè)體積，化合物取代已知的配體或底物利用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中產(chǎn)生生化反應(yīng),，并使用光學(xué)方法讀出,，如吸光度，熒光,，或發(fā)光,。再對(duì)可能成藥的化合物進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證如濃度梯度實(shí)驗(yàn)等。
德國(guó)耶拿公司CyBio-FeliX自動(dòng)移液工作站可以搭載384通量的移液頭完成高精度,、高均一的整板同步移液,。也可以在整板同步移液前后，自動(dòng)切換為單列16通道或者單排24通道的移液方式,，自動(dòng)完成連續(xù)梯度稀釋的工作,。相比于手工或半自動(dòng)系統(tǒng)，擁有12個(gè)標(biāo)準(zhǔn)SBS板位的自動(dòng)移液工作站CyBio-FeliX不僅可以提高篩選效率和自動(dòng)化程度，也可更好的提升篩選體系的標(biāo)準(zhǔn)化程度,。
小分子藥物還可以基于它們改變細(xì)胞表型的能力來(lái)篩選和發(fā)現(xiàn),。基于細(xì)胞篩選的方法通常更適合于：
未知靶點(diǎn)蛋白或多個(gè)靶點(diǎn)蛋白,；
生化方法不能在細(xì)胞外穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)的反應(yīng),；
表型改變只存在于細(xì)胞背景下；
需要同時(shí)驗(yàn)證化合物的膜通透性和細(xì)胞毒性,。
德國(guó)耶拿公司CyBio-FeliX自動(dòng)移液工作站可置于常規(guī)生物安全柜內(nèi),，自動(dòng)完成基于細(xì)胞表型篩選工作中的液體處理工作。