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酵母互補實驗的快速檢測方法

閱讀:2377      發(fā)布時間:2021-10-21
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 酵母,一種體內(nèi)模式生物,,具有很大的優(yōu)勢,。釀酒酵母,芽殖酵母,,是一種單細(xì)胞真核生物,。大多數(shù)進程,例如轉(zhuǎn)錄,,翻譯,,蛋白質(zhì)折疊都是保守的,,因此酵母是一種非常合適的復(fù)雜哺乳動物細(xì)胞的替代品。

 

與其他模式生物不同,,例如大腸桿菌,,酵母沒有毒性,而且能表達完整的膜蛋白,。

 

1996年對酵母基因組進行測序后,,出現(xiàn)了許多用于基因操作的工具。發(fā)明了例如穿梭載體,,通過同源重組刪除基因,。可以使用具有缺失菌株的大型文庫,,輕松設(shè)置功能分析,。

 

酵母互補試驗,缺失某種蛋白質(zhì)的酵母突變體,,通過轉(zhuǎn)基因?qū)⒁粋€外顯子基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)入突變體,。此時,這株酵母突變體面對一種境況,,就是這種缺失掉的蛋白質(zhì)功能會影響它的存活和生長,。如果這種缺失型突變體生長出來了,就意味著這種轉(zhuǎn)入的外顯子基因補償了這種缺失基因的功能,,使得酵母細(xì)胞能夠正常存活和生長,。有一些方法可以檢測酵母的互補試驗,比如液體測量,,尿素測量法,,氨測量法,水份測量法等,。在此,,我們介紹一種方法:計數(shù)酵母的方法。

 

CellDrop 明場計數(shù)酵母細(xì)胞:采用*的小細(xì)胞模式,,結(jié)合AI算法,,準(zhǔn)確計算酵母細(xì)胞總數(shù)

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不僅如此,,采用熒光染料FDA+PI的組合,,可以進行酵母細(xì)胞的活力檢測

 活性檢測:

     活性檢測即用兩種不同的熒光試劑進行染色。Y20.1細(xì)胞,,過夜誘導(dǎo),,在明場計數(shù)儀下計數(shù)5e6 cells/ml. 針對CellDrop 酵母活性分析(DeNovix18ul的細(xì)胞懸浮液和1ulFDAPI?;旌衔锉芄庀?/span>15min,。10ul的混合物側(cè)面peptide入到celldrop中,,進入yeast app進行測量。

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   活力檢測中,,應(yīng)用熒光試劑判斷酵母細(xì)胞的死活,,將檢測時間從5天的尿素檢測或氨檢測時間縮短到了十幾秒。

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    無需一次性或可重復(fù)利用的計數(shù)板,,CellDrop BF/FL做到絕對的無耗材,是新一代計數(shù)儀的代表,。


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