瓊脂糖凝膠電泳實驗步驟：

(1)安裝電泳管

選擇聚含均勻,、無氣泡,、無裂縫、膠面平整并與管壁沒有脫離現(xiàn)象的合格凝膠電泳管 插入上電極槽底板的各圓孔中,，留1/5在底板上方,，保證使電泳管與底板垂直，密封處不 致滲漏,。

(2) 加樣

可利用上述方法制成樣品膠,，也可以用如下的一種方法加樣。

將樣品溶于200mg/ml濃度的蔗糖溶液中,，或溶在10%甘油中,，然后加在濃縮膠的 表面。

或?qū)⑷刍沫傊c樣品溶液混合后加在濃縮膠表面,。

或用與電泳管內(nèi)徑相近的圓形厚濾紙片,，將樣品溶液吸收后，緊貼在濃縮膠表面,。 如樣品是固體,，應(yīng)先溶在濃縮膠緩沖液中，并加入足夠量lmol/L的蔗糖溶液,，使樣 品溶液的比重增大,，再加在濃縮膠表面.

必須保證樣品溶液具有低電導(dǎo)性，鹽濃度不應(yīng)超過0. 05mol/L_o

目前常用的加樣方法是：用稀釋5-10倍的濃縮膠緩沖液,，使其成lmg/ml的濃 度,，再加蔗糖使成濃度,，然后在濃縮膠面上有電極緩沖液存在的情況下，用合 適的加樣工具如微堇注射器,，插入濃縮膠面與上方的電極緩沖液界面處,，輕輕地將樣品加 在濃縮膠面上.

(3) 加電泳緩沖液

樣品加入后，在上下兩個電泳槽中灌注電極緩沖液,，緩沖液的溫度需與電泳溫度一 致,。加入緩沖液時應(yīng)小心操作，不能攪動電泳管中的樣品溶液,，并不使電泳管上下口留有 氣泡,。緩沖液的用垃隨容器的大小而有異。一般情況下電極槽中的緩沖液量能使電泳管 至少有3/5浸入緩沖液為宜,。

(4) 加指示染料

對于電泳系統(tǒng)常用的指示染料為0. 001%溴酚藍,，酸性系統(tǒng)常用的是0. 005%甲基綠 或甲烯藍。用量為每500ml緩沖液加指示染料1ml_D 一般加在上電泳槽緩沖液中,。

(5) 瓊脂糖凝膠電泳

在電泳槽上裝配好電極,，接通直流電源。堿性系統(tǒng)上電極接負極,，酸性系統(tǒng)上電極接正極,。

對于直徑5?7mm的凝膠，初2分鐘用1mA/管的電流進行電泳,，然后逐漸升高到 2?5mA/管（10分鐘）,。通常5mm X 65mm的凝膠在20 C時用4mA/管進行電泳,大約需時40分鐘,。

在電泳過程中,，常要求電流保持恒定。此時,，電壓會有升高,。如果電流大而產(chǎn)生過高 的歐姆熱，影響某些樣品時,，可以降低電流而延長電泳時間,。

   電泳時間的長短與所用電流和凝膠的長度有關(guān)。為了節(jié)約時間也可以使用天能預(yù)制膠,。但即使應(yīng)用同樣長度的凝膠,，也會因凝膠系統(tǒng)和 樣品性質(zhì)的不同，而使電泳時間有差別,。對于一般的 分析工作來說,，如指示染料已遷移至距凝膠下端3? 6mm時,就可停止電泳，切斷電源,取出電泳管,。電極緩沖液可重復(fù)使用若干次,，上下電極緩沖 液一般不要混合貯存,，也不要將前一次的負極緩沖 液作下一次電泳時的正極緩沖液。因為經(jīng)電泳后,，二 電極的緩沖液組成已有了變化,。

 有時候，我們需要進行長時間的電泳,。例如:DNA的分離有時長達10余小時,。為了防 止由于電極反應(yīng)使緩沖能力耗盡從而引起pH的變化影響分離，1977年美國匹茲堡大學 T.G. Cooper提出用循環(huán)緩沖液的辦法來保持緩沖能力不致耗盡,，以達到緩沖溶液能較 長期使用的目的,。

上下兩個電泳槽的緩沖溶液水平保持恒定，但又沒有建立通路,。下槽的緩沖液可靠輸 液器一滴一滴地滴入上槽,。而當上槽的緩沖液增加時，就會經(jīng)溢流管滴回到下槽,，使上下 兩槽的緩沖液水平在電泳過程中始終保持恒定,。要注意的是,滴入上槽中的緩沖液，必須 不是線狀連續(xù)的,。 

瓊脂糖凝膠的取出

電泳結(jié)束取出電泳管,。然后,用配有細長針頭并盛有水的注射器，將針頭小心地插入 凝膠和玻璃管壁之間,，邊插入轉(zhuǎn)動管子同時壓進一些水,，另一端也作同樣處理。然后,，將管F套上橡皮管用自來水壓力壓出凝膠,，或用洗耳球壓岀凝膠。如果壓岀凝膠困難時,，注射 器內(nèi)可裝甘油代替水壓入凝膠和管壁之間,。也可以用一根金屬細絲，從凝膠和管壁之間穿 過整個玻璃管,，然后,，拉緊金屬細絲轉(zhuǎn)動玻璃管一周，就能使凝膠脫離管壁,，再用洗耳球擠 壓,，就很容易壓出。

也可以將電泳管浸入甲醇中,，使凝膠收縮與管壁脫離而取岀,，或根據(jù)具體條件用別的 辦法取出凝膠。但必須注意,，無論用何種辦法,，必須不損傷膠面,。特別是濃度低的大孔凝 膠，機械強度差,，取岀時應(yīng)格外小心,。