臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells,，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞,，廣泛應(yīng)用于組織工程,，細(xì)胞治療和基因治療,。 HyCyte®臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞取自滿月自然分娩的胎兒臍帶,，傳代擴(kuò)增至第二代凍存,。本產(chǎn)品經(jīng)生物安全檢測,，無細(xì)菌、真菌,、霉菌,、支原體和病毒污染，表達(dá)多種人源間質(zhì)干細(xì)胞特異性標(biāo)記,，具有良好的增殖和分化潛能,，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞等,。

一、實驗?zāi)康?/span>

  驗證HyCyte®人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對于人臍帶華通質(zhì)膠中提取間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的能力,。人體臍帶橫截面示意圖,，臍帶內(nèi)層覆蓋，外層為臍上皮,，三個臍血管嵌在華通質(zhì)膠中,。華通質(zhì)膠是一種凝膠狀結(jié)締組織，由富含糖胺聚糖（主要是透明質(zhì)酸）,、膠原纖維和肌成纖維細(xì)胞以及偶爾存在的肥大細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)組成,。華通質(zhì)膠基質(zhì)細(xì)胞在血管周圍附近最為豐富，在血管間華通質(zhì)膠中變少,。

二,、實驗試劑和實驗耗材

試劑：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Cat.No.: UCHX-G101）

間充質(zhì)干細(xì)胞 其他配套試劑均為HyCyte

耗材：T175培養(yǎng)瓶

三、實驗步驟

(1)用無菌輔料鑷從轉(zhuǎn)運瓶中取出臍帶,，置于1×PBS培養(yǎng)皿中,。

(2)清洗臍帶，轉(zhuǎn)移至另一1×PBS培養(yǎng)皿中,，重復(fù) 3次,。

(3)將臍帶剪成4 cm左右小段，再清洗3次,。

(4)去臍帶血管,、羊膜,，取華通膠。

(5)華通膠轉(zhuǎn)移至1個50 ml離心管中,，剪碎至糜狀,。

(6)T175瓶中加入40 ml人臍帶干細(xì)胞培養(yǎng)基。

(7)按每個T175瓶1 ml組織接種,?；靹颍o置培養(yǎng),。

(8)靜置培養(yǎng)5 d以上,，觀察貼壁克隆少，繼續(xù)培養(yǎng),。

(9)培養(yǎng)7 d后,，觀察貼壁克隆多，加培養(yǎng)基培養(yǎng),。

(10)培養(yǎng)9 d后,，克隆已有較大規(guī)模增殖，繼續(xù)培養(yǎng),。

(11)培養(yǎng)第10天,，按1:1傳代于新 T175瓶。同時,，組織轉(zhuǎn)移至新T175瓶進(jìn)行二次遷移,。

實驗總結(jié)

   本次實驗歷時18天，成功分離培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞,。臍帶組織塊貼壁正常（通常臍帶組織貼壁形成克隆時間在5-10天）,。觀察到貼壁細(xì)胞形態(tài)為長梭狀，邊緣明亮,。在傳代中,，P1 代細(xì)胞形態(tài)正常，密度均勻,。此后傳代3次,，無老化現(xiàn)象。匯合度較高時,，細(xì)胞呈明顯漩渦狀極性,。本產(chǎn)品可正常提取、培養(yǎng) 臍帶間質(zhì)干細(xì)胞 ,。