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更新時(shí)間:2024-08-21 21:01:45瀏覽次數(shù):283次
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操作程序
(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求,,制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝,,每袋2片,。每次試驗(yàn)用20袋,。
(2) 將滅菌器上、中,、下3層,,每層內(nèi)、中,、外各設(shè)一點(diǎn),,共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋,,共需18袋試驗(yàn)菌片,。另將一袋(2片)菌片放置在室溫條件下作為陽(yáng)性對(duì)照。
(3) 按使用說(shuō)明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度,、作用時(shí)間,、柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度,在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理,。滿載用物品,,隨滅菌器用途而定。處理完畢,,取出菌片,,分別移種于5 ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),,7d后觀察最終結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測(cè)),。
對(duì)難以判斷結(jié)果的營(yíng)養(yǎng)肉湯管,取其中0.2ml懸液接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,,用無(wú)菌L棒涂抹均勻,,置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色,,顯微鏡下觀察菌落形態(tài),,或進(jìn)一步做其他試驗(yàn),判斷有無(wú)生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的是否為試驗(yàn)菌,。若為非試驗(yàn)菌,,則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。
(4) 測(cè)試中,,應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組,。
(5) 定量陽(yáng)性對(duì)照組,以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,,待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,,立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中,各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù),。
(6) 定性陽(yáng)性對(duì)照組,,以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,,立即將該菌片2 片,,分別接種于5.0ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,放入溫箱中作定性培養(yǎng),,觀察有細(xì)菌生長(zhǎng)情況,。
(7) 陰性對(duì)照組,以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2 片,,分別接種于5.0ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,,同時(shí)將未接種過(guò)的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng),。
(8) 試驗(yàn)重復(fù)5 次,。
(9)在5次試驗(yàn)中,每次試驗(yàn)中的陽(yáng)性對(duì)照菌片,,回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片~5×10cfu/片,;定性陽(yáng)性對(duì)照組,細(xì)菌生長(zhǎng)良好,;陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng),。陽(yáng)性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果,試驗(yàn)作廢,,重新進(jìn)行,。
評(píng)價(jià)規(guī)定
在5 次滅菌試驗(yàn)中,每次試驗(yàn)中的定量陽(yáng)性對(duì)照組,,檢測(cè)回收菌量均達(dá)5 × 10cfu/ 片~5 × 10cfu/ 片,;定性陽(yáng)性對(duì)照組,細(xì)菌生長(zhǎng)良好,。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng),。所有試驗(yàn)菌片全部無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí),可判為滅菌合格,。
二手10立方環(huán)氧乙烷滅菌箱
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