全自動(dòng)環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

目的

測(cè)定環(huán)氧乙烷滅菌器(下簡稱滅菌器) 對(duì)細(xì)菌芽孢的殺滅能力,，以驗(yàn)證其滅菌性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定,。

試驗(yàn)器材

(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片,。

含菌量要求為5 ×10cfu/片～5 × 10cfu/片(按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì))。在環(huán)氧乙烷量為600mg/L±30mg/L,，溫度為54℃±2℃,，相對(duì)濕度為60%±10% 條件下，菌片上芽孢存活時(shí)間應(yīng)≥7.8min,，殺滅時(shí)間≤58min,，D值為2.6min～5.8min,。

(2) 染菌載體( 10mm × 10mm ，以布片為代表,，必要時(shí)可隨滅菌對(duì)象,，增用或改用其他載體。

(3) 聚乙烯塑料袋( 封裝菌片用,，大小為60mm× 40mm ,，厚0.2mm～0.4mm )。

(4) 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見2.1.1.3 ),。

(5) 使用說明書中規(guī)定滅菌器可處理的物品(裝填滅菌器,，使達(dá)滿載要求)。

全自動(dòng)環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

操作程序

(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求,，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片,。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝，每袋2片,。每次試驗(yàn)用20袋,。

(2) 將滅菌器上、中,、下3層,，每層內(nèi)、中,、外各設(shè)一點(diǎn),，共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋,，共需18袋試驗(yàn)菌片,。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對(duì)照。

(3) 按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度,、作用時(shí)間,、柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度，在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理,。滿載用物品，隨滅菌器用途而定,。處理完畢,，取出菌片，分別移種于5 ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),，7d后觀察結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測(cè))。

對(duì)難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管,，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板,，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色,，顯微鏡下觀察菌落形態(tài),，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷有無生長或生長的是否為試驗(yàn)菌,。若為非試驗(yàn)菌,，則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。

(4) 測(cè)試中,，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組,。

(5) 定量陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,，待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次,。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù),。

(6) 定性陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下,，待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后,，立即將該菌片2 片，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,，放入溫箱中作定性培養(yǎng),，觀察有細(xì)菌生長情況。

(7) 陰性對(duì)照組,，以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2 片,，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),，觀察有無細(xì)菌生長,。

(8) 試驗(yàn)重復(fù)5 次。

(9)在5次試驗(yàn)中,，每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片,，回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽性對(duì)照組,，細(xì)菌生長良好,；陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果,，試驗(yàn)作廢,，重新進(jìn)行。