隨著分子生物學(xué)研究逐步的普及,,使得凝膠成像系統(tǒng)在國內(nèi)的需求不斷增長,。無論是什么用途,凝膠成像的組件都是相似的,,都是由一個拍攝系統(tǒng),、一個帶有特殊光源的暗箱與獲取和分析凝膠圖片的軟件組成。
總體上來說凝膠成像系統(tǒng)可應(yīng)用于:蛋白質(zhì),、核酸,、多肽,、氨基酸,、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析。
1,、分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,,利用分子量定量功能,通過對膠上DNAMarker條帶的已知分子量注釋,,自動生成擬合曲線,,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計要準(zhǔn)確很多,。
2,、密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度,。
利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,,可以方便的單擊其他未知條帶,,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量,。此方法也適用于對PAGE蛋白膠條帶的濃度測定,。
3、密度掃描
在分子生物學(xué)和生物工程研究中,,常用到的是對蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量的計算,。傳統(tǒng)的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結(jié)合實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作,。
4,、PCR定量
PCR定量主要是指,,如果PCR實驗擴(kuò)增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分?jǐn)?shù),。就此功能而言,,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同,。
PCR定量是對選定的幾條帶進(jìn)行相對密度定量并計算其占總和的百分?jǐn)?shù),,密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
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