水是細胞賴以生存的主要環(huán)境,,營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物都必須溶解在水中,才能為細胞吸收和排泄,。對于體外培養(yǎng)的細胞來說,,水是所有細胞培養(yǎng)用液和試劑中較簡單,、但也是最重要的組分。細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,,培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì),,即使含量極微,有時候也會影響細胞的存活和生長,,甚至導致細胞死亡,。
水中的雜質(zhì)對水質(zhì)有不同影響:
離子,平衡滲透壓,;
微生物,,污染,改變微壞境如pH,,影響增殖,,死后釋放內(nèi)毒素等;
內(nèi)毒素,,改變細胞外形,、活化細胞、促進或抑制細胞分裂,、影響細胞附著等,;
有機物,水中有機物所含碳的總量可間接反映出水中細菌和內(nèi)毒素的含量,,應(yīng)控制在合理范圍內(nèi),,以免影響細胞培養(yǎng)。
水質(zhì)評價常用的指標:
電阻率(electrical resistivity),,衡量實驗室用水導電性能的指標,,單位為MΩ·cm,隨著水內(nèi)無機離子的減少電阻數(shù)值逐漸變大,;
異體菌落數(shù)(heterotrophic bacteriacount,HBC),,衡量實驗室用水微生物的指標,,單位為cfu/ml
有機物(total organic carbon,TOC),,水中碳的濃度,,反映水中可氧化的有機化合物的含量,單位為μg/L或ppd,;
內(nèi)毒素(endotoxin),,革蘭氏陰性菌的脂多糖細胞壁碎片,又稱為“熱原",,單位EU/ml,。
參考國際標準化組織的實驗室純水規(guī)范ISo3696,,美國臨床試驗室標準化協(xié)會(Clinical and Laboratory Standards Institute)及美國試驗和材料學會(American Society for Testing and Materials)D1193的試劑純水規(guī)范,我國GBT6682和GBT30301的實驗用水指導,,結(jié)合實際的實驗操作經(jīng)驗,。總結(jié)細胞培養(yǎng)的水質(zhì)要求 :
一定要無菌,,HBC<0.1cfu/ml,;
無蛋白及核酸酶和內(nèi)黑素;
無內(nèi)毒素或無熱源,,<0.001EU/ml,;
TOC<3ppd,一些重金屬(鎘)毒害大,,即便是很低劑量(<0.1ppd)也有影響,;
電阻率≥18MΩ.cm
細胞培養(yǎng)以及各種培養(yǎng)液和試劑的配置用水均需要經(jīng)過嚴格的純化處理;即使是玻璃器皿,,在用自來水清洗過后也應(yīng)至少用超純水漂洗三次以上,。
目前,市場上供應(yīng)的純水裝置種類較多,, 比如自來水進水同時制備二級純水和超純水的一體化純水裝置,,可以由自來水進水通過預(yù)處理柱、反滲透柱及電去離子(EDI)模塊等純化后達到二級純化水,,儲存于水箱中以滿足日常的清洗,;水箱中的水再經(jīng)過超純化柱去離子,紫外燈照射殺菌和降低有機物,,最后經(jīng)終端除內(nèi)毒素濾器達到無菌無熱源的超純水,。
純水的儲存對保持水的質(zhì)量也是至關(guān)重要的,由于周圍環(huán)境和空氣中的二氧化碳更容易使水污染改變其pH,,所以儲存水的容器要盡量密封,,避免和外界過多接觸,抑制微生物生長,。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機水箱中內(nèi)置紫外燈和二氧化碳吸附濾器長期保證水箱中純水的水質(zhì),。
對于超純水而言尤其需要格外注意終端水質(zhì)的TOC、電阻率,、細菌和內(nèi)毒素的含量,,必須做到即取即用。因此取水水質(zhì)實時監(jiān)測顯得尤為重要,。EVOQUA的Ultra Clear系列超純水機擁有7" 彩色觸摸顯示屏,,可以顯示各階段水質(zhì)等重要參數(shù)和耗材更換倒計時,操作簡單直觀,。UV燈,、TOC監(jiān)測和UF超濾模塊保證了優(yōu)秀的水質(zhì),。這些裝置可有效去除 RNase、DNase 和DNA 等污染物,。并可使內(nèi)毒素水平低于 0.001EU/ml,。
EVOQUA 懿華,Ultra Clear TP ED 20 TWF EDI 30 UV UF TM 超純水機
【注意事項】
超純水應(yīng)當注意使用時間,,最好即取即用,。防止超純水吸取外界的雜質(zhì)導致水質(zhì)下降。
在合適的環(huán)境使用超純水,。環(huán)境中的揮發(fā)性有機物,、細菌等都會影響細胞培養(yǎng)。
培養(yǎng)細胞的容器應(yīng)當潔凈無污染,。
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