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液相色譜柱使用中不可不知的8個注意事項,！
液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，學會正確使用液相色譜柱，了解液相色譜的一些使用注意事項可以避免一些不必要的麻煩,，進而提高實驗人員的工作效率,，今天小編就為大家總結了8項液相色譜柱的注意事項。
1,、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動
2,、應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成
特別是反相色譜中,，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
3,、一般說來色譜柱不能反沖
只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效,。
4,、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞,。
有時可以在進樣器前面連接一預柱,，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠,，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
5,、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,，清除保留在柱內(nèi)的雜質。
在進行清洗時,，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。
硅膠柱以正已烷(或庚烷),、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗,，所有溶劑都必須嚴格脫水,。
甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水,、甲醇,、乙腈、一氯甲烷依次沖洗,，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,，那么可以省略后用水沖洗這一步,。
與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外,，用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質污染,。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽,，然后用水,、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物),、甲醇,、水依次沖洗。6,、保存色譜柱
應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間,。
7、色譜柱使用過程中壓力升高的原因
如果壓力升高,，一種可能是燒結濾片被堵塞,，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi),，使柱頭被污染,；
8、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,，使柱效下降,，這時也可補加填料使柱效恢復。
每次工作完后,，用洗脫能力強的洗脫液沖洗,，例如，ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡,。當采用鹽緩沖溶液作流動相時,，使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟,、氯,、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸,。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,，應每隔4～5天開機沖洗15分鐘。