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醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室——PCR實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)設(shè)計(jì)原則和基本要求
臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室又稱PCR實(shí)驗(yàn)室，其特點(diǎn)是能將微量的DNA和RNA大幅擴(kuò)增,，PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,，廣泛運(yùn)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域，例如：檢驗(yàn)艾滋病,、乙型肝炎,、丙型肝炎、禽疫病,、癌基因的檢測,，DNA指紋、個體識別,、親子鑒定及法醫(yī)物證,，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等,。
1、 PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
PCR實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)不同的操作平臺設(shè)計(jì)不同的分區(qū),，甚至可只需設(shè)置一間,，一臺儀器可做到從制備一擴(kuò)增一分析。PCR實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個單獨(dú)的工作區(qū)域,，即試劑貯存區(qū),、樣本處理區(qū)、基因擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),。各區(qū)之間必須*隔斷,，不得有空氣流通。試劑,、樣品,、實(shí)驗(yàn)材料只能按單向流動，即從試劑貯存區(qū)一樣本制備區(qū)一基因擴(kuò)增區(qū)一產(chǎn)物分析區(qū),，不得逆向流動,。 實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從第yi區(qū)流向后區(qū)，不得逆向流動,。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間,，工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室,，并有明顯的標(biāo)志,，各區(qū)間不能直通。各工作間需安裝物品傳遞窗,。每個工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈,，安裝數(shù)量為每20m2安裝一只40W的紫外燈，同時應(yīng)配置可移動紫外燈,。
PCR實(shí)驗(yàn)室較為理想的布局模式為有一個走廊,，試劑貯存區(qū)、樣本制備區(qū),、基因擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起,，各區(qū)均設(shè)緩沖區(qū)，可供換工作服和工作鞋使用,，頂上需裝一盞紫外燈,。試劑貯存區(qū)和樣本制備區(qū)工作區(qū)域?yàn)橄鄬φ龎海痪彌_區(qū)域?yàn)橄鄬ω?fù)壓,。擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)工作區(qū)域?yàn)橄鄬ω?fù)壓,，緩沖區(qū)域?yàn)橄鄬φ龎骸?這種壓力差可通過送排風(fēng)裝置調(diào)節(jié)。緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門必須斜對角設(shè)置,，不宜直接相對,，并可安裝連鎖裝置,，當(dāng)一個門打開時，另一個門必須處于關(guān)閉狀態(tài),，防止出現(xiàn)兩個門同時打開的情況。緩沖間的門宜能互鎖,。如果使用互鎖門,，應(yīng)在互鎖門的附近設(shè)置緊急手動互鎖解除開關(guān)。
每個區(qū)域都必須有明確的標(biāo)記,，工作按試劑貯存區(qū),、樣本制備區(qū)、基因擴(kuò)增區(qū),、產(chǎn)物分析區(qū)單一liu向進(jìn),。
如無法做到以上模式，以下基本要求必須做到：
（1）如果使用適時熒光定量PCR擴(kuò)增儀,，擴(kuò)展區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可以合并,，使整個PCR室分為三個區(qū)，即試劑制備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一擴(kuò)增分析區(qū),。如果使用從樣本處理到擴(kuò)增分析一體化的全自動檢測系統(tǒng),，后兩區(qū)又可以合并，使整個PCR室分為兩個區(qū)域,，即試劑貯存區(qū)和基因檢測區(qū),。
（2）各區(qū)*獨(dú)立，相互之間在工作區(qū)域安裝物品傳遞窗,。
（3）各個區(qū)域必須要有獨(dú)立的緩沖間,，供換工作服及鞋子用，并保證與工作區(qū)間始終處于相對的分隔狀態(tài),。
（4）各工作區(qū)域和緩沖間均應(yīng)安裝換氣裝置,，以調(diào)節(jié)氣流壓力。
（5）各區(qū)域間的送排風(fēng)管道必須獨(dú)立設(shè)置,，不得聯(lián)通,。
2、各區(qū)功能及主要設(shè)備
（1）試劑貯存區(qū)：該實(shí)驗(yàn)區(qū)的主要功能是貯存和制備試劑,。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的應(yīng)用試劑,，該區(qū)的主要設(shè)備是低溫冰箱。
（2）標(biāo)本制備區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存,、核酸(RNA,，DNA )提取,、貯存及純化。該區(qū)的設(shè)備主要有生物柜,、離心機(jī),、低溫高速離心機(jī)、水浴箱,、冰箱,、微量振蕩器等。
（3）基因擴(kuò)增區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增,，現(xiàn)已同時具備擴(kuò)增產(chǎn)物分析的功能,。主要設(shè)備有核酸擴(kuò)增儀及電腦控制系統(tǒng)。
（4）產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定,。
3,、空調(diào)通風(fēng)及凈化
（1）實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制各個區(qū)域之間應(yīng)形成單一liu向的物流，人流與氣流,，形成單一liu向的保護(hù)屏障,，避免實(shí)驗(yàn)室之間的相互干擾。
（2）采用機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng),，室外送風(fēng)口和排風(fēng)口應(yīng)采取防雨,，防風(fēng)，防雜物防昆蟲及其他動物的措施,，送風(fēng)口應(yīng)遠(yuǎn)離排風(fēng)口,。排風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)使用空氣過濾器。
（3）PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,，但是為了避免各個實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,，宜采用全送全排的氣流組織形式。 同時,，要嚴(yán)格控制送,、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)室的壓力要求。
（4）工作間氣壓相對于相鄰區(qū)域應(yīng)為負(fù)壓,，壓差宜不低于 10Pa,。在工作間入口的顯著位置，應(yīng)安裝顯示房間負(fù)壓狀況的壓力顯示裝置,。
（5）實(shí)驗(yàn)室的排風(fēng)應(yīng)與送風(fēng)連鎖,，排風(fēng)先于送風(fēng)開啟，后于送風(fēng)關(guān)閉,。
（6）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有措施防止產(chǎn)生對人員有害的異常壓力,，圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)能承受送風(fēng)機(jī)或排風(fēng)機(jī)異常時導(dǎo)致的空氣壓力載荷。
4,、注意問題
（1）各區(qū)域的大小設(shè)置,，應(yīng)根據(jù)儀器設(shè)備數(shù)量和工作內(nèi)容確定,。一般要求試劑貯存區(qū)小，樣本處理區(qū)大,，基因擴(kuò)增及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)大小介于兩者之間,。
（2）試劑制備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)設(shè)立緊急洗眼器,，以備不時之需,。實(shí)驗(yàn)室走廊內(nèi)應(yīng)設(shè)緊急洗置和緊急噴淋裝置。
（3）PCR實(shí)驗(yàn)室的潔凈度可以根據(jù)用戶的實(shí)際情況和資金的投入來設(shè)計(jì),。
（4）應(yīng)根據(jù)工作性質(zhì)和流程合理擺放實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,、臺柜,、物品等,，避免相互干擾、交叉污染,，并應(yīng)不妨礙逃生和急救,。臺(桌)柜和設(shè)備之間應(yīng)有足夠的間距，以便于清潔,。
（5）實(shí)驗(yàn)室主入口的門應(yīng)有進(jìn)人控制措施,。實(shí)驗(yàn)室入口應(yīng)有生物危害標(biāo)識，出口應(yīng)有逃生發(fā)光指示標(biāo)識,。
（6）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)配置內(nèi)排式壓力蒸汽滅菌器,，以及其他適用的消毒設(shè)備。