用戶真實反饋:科研大咖的“真香"體驗
“CD3被敲低了80%多!你們這試劑的確有點東西,!我做原代的,,每次都得敲,以后我要長期回購,!"
這條來自一線科研人的反饋,印證了ProteanFect CRISPRMax的硬核實力,。無論是基因敲除,、點突變還是大片段插入,,這款試劑盒均能穩(wěn)定輸出高效結果。
今天,,我們?yōu)槟鷰硪豢罡锩援a品——ProteanFect CRISPRMax Cas9基因編輯轉染試劑盒,。它憑借非病毒、非電轉,、非脂質體的獨·特技術,,輕松實現原代細胞80%以上的基因編輯效率,成為國內外實驗室的“明星工具",!
產品核心優(yōu)勢:為何選擇ProteanFect CRISPRMax,?
1. 專為原代與難轉細胞設計,效率突破瓶頸
原代細胞轉染效率高達80%+:用戶實測數據顯示,,人原代Treg細胞中CD3基因敲低效率超過80%,,與說明書中的流式數據(86% CD3陰性率)高度一致。
難轉細胞系的救星:無論是懸浮細胞還是貼壁細胞,,均能穩(wěn)定遞送Cas9 mRNA和sgRNA,,共表達率超90%。
2. 安全無憂:非病毒,、無毒性,、零殘留
基于自組裝蛋白納米顆粒技術,無需病毒載體或脂質體,,避免基因組整合風險,顯著降低細胞毒性,。
轉染后細胞活力恢復快,,第二天即可正常培養(yǎng),實驗周期大幅縮短,。
3. 操作極簡,,節(jié)省成本
預混試劑+明確步驟:只需按表配置Reagent A/B/C,孵育后即可完成轉染,。
無需耗費高成本構建基因敲除鼠,,直接實現T細胞穩(wěn)定基因高效敲除。
技術揭秘:蛋白納米顆粒如何實現高效遞送,?
ProteanFect CRISPRMax的核心在于其自組裝蛋白納米顆粒技術:
高效負載:帶正電的納米顆粒通過靜電作用吸附Cas9 mRNA和sgRNA,,形成穩(wěn)定復合物。
精準遞送:復合物通過內吞作用進入細胞后,,迅速釋放核酸,,避免溶酶體降解。
安全釋放:無需依賴病毒或脂質體的膜融合機制,,減少細胞損傷,。
實驗驗證:
靶向人TRAC基因的sgRNA轉染原代T細胞后,,TIDE測序顯示編輯效率達88.5%,與流式結果高度吻合,。
EGFP mRNA共轉染陽性率超90%,,輕松監(jiān)控轉染效果。
數據分享:高效基因編輯,,從ProteanFect開始
使用 ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯轉染試劑盒轉染人原代 T 細胞,,使用試劑盒中的 human TRAC-sgRNA 陽性對照敲除 TRAC 基因。在轉染 72 小時后,,收集細胞,,在蛋白水平(圖 1)和 DNA 水平(圖 2)檢測基因敲除的效率。
圖 1. 使用 ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯轉染試劑盒編輯人原代 T 細胞中 TRAC基因后,,TCR 蛋白表達的流式檢測結果。流式結果顯示,,陽性對照組中約 86%的 T 細胞為 CD3陰性,,表明該試劑盒同時遞送 Cas9 mRNA/sgRNA,總細胞群中約有 86%細胞的 TRAC 基因被成功編輯,。
圖 2.使用 ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因編輯轉染試劑盒編輯人原代 T 細胞中 TRAC 基因的測序分析結果。收集轉染后的總細胞提取基因組 DNA,,對靶點位置 PCR 擴增(正向引物序列:GCAGTATTATTAAGTAGCCCT,,反向引物序列:AACAAGGCTCACTGTTTCTT)并進行Sanger 測序,通過 TIDE 對測序結果進行分析,,結果顯示陽性對照組中靶點基因被編輯的比例約為 88.5%,,與流式檢測蛋白水平的敲除結果(CD3-TCR 流式陰性比例)相當。
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