小鼠原代免疫細胞的精準基因編輯可直接操控免疫關(guān)鍵分子,，實現(xiàn)功能與信號通路的快速驗證,，在保留細胞生理特性的同時避免了耗時的轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建。然而,，這一研究利器長期受困于技術(shù)瓶頸——傳統(tǒng)的慢病毒,、電穿孔和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)在遞送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白（Cas9-RNP）復(fù)合物時效率低下，且嚴重損傷細胞活力。西湖凝聚體與西湖大學(xué)聯(lián)合開發(fā)的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒,，通過創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù),，遞送 sgRNA 與重組 Cas9 蛋白 RNP 進入小鼠免疫細胞并實現(xiàn)高效基因編輯，為免疫學(xué)研究提供了突破性解決方案,。同時,，整個過程簡單高效，且無需 sgRNA-Cas9 提前孵育,，使原代免疫細胞轉(zhuǎn)染像 HEK293 細胞系一樣容易,！
ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因編輯機制
ProteanFect 遞送系統(tǒng)實現(xiàn)基因編輯的分子機制如下（圖1）：
1、Cas9 蛋白,、sgRNA與 ProteanFect 內(nèi)源蛋白一起組裝成為 Cas9 RNP-凝聚體復(fù)合物,；
2、Cas9 RNP 通過 Proteanfect 遞送進入細胞內(nèi),；
3,、Cas9 RNP 復(fù)合物被 Proteanfect 釋放并進入細胞核與靶 DNA 結(jié)合；
4,、精準切割靶基因,，實現(xiàn)高效基因編輯。
圖1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP遞送原理
這種遞送策略極大避免了電穿孔等物理方法對細胞膜的損傷,，以及病毒載體可能引起的免疫原性問題,，同時實現(xiàn)了比直接遞送 RNP 蛋白更高的編輯效率。
ProteanFect CRISPRMax Ultra遞送系統(tǒng)：效率與細胞活性的平衡：
無需預(yù)組裝,，凝聚體作為高效生物反應(yīng)器,，制備過程中，一分鐘之內(nèi)即可完成快速組裝,；
無需入胞后翻譯成蛋白,，快速進入后直接進行基因編輯；
不依賴于持續(xù)激活,，能保持穩(wěn)定的編輯效率,；
高效實現(xiàn)小鼠原代T細胞、NK細胞,、γδ T細胞,、Treg細胞等免疫細胞的基因編輯。
實驗數(shù)據(jù)：小鼠原代T細胞中的超高效基因編輯ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代 T 細胞進行基因編輯：采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 轉(zhuǎn)染的方案,，結(jié)果如下圖1所示,。基因組水平檢測（圖2左）顯示小鼠 T 細胞整體 Trac 敲除率達83.5%,，蛋白水平檢測（圖2右）顯示 Trac 敲除效率達93.0%,。
圖2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代T細胞進行基因編輯
突破傳統(tǒng)：ProteanFect CRISPRMax Ultra與其他CRISPR方法對比
表1. ProteanFect與傳統(tǒng)CRISPR方法對比
全·球首·創(chuàng)：基于生物分子凝聚體的分子遞送技術(shù)
ProteanFect 凝聚體技術(shù)：ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect蛋白分子能夠在體外與核酸,、蛋白等自組裝成高度規(guī)律的球體結(jié)構(gòu)，這種自組裝而成的ProteanFect-核酸/蛋白復(fù)合物能夠通過細胞的主動攝入高效進入細胞內(nèi),，迅速釋放核酸分子,，實現(xiàn)基因表達，同時天然降解其余蛋白,。
圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖(以遞送核酸為例)
ProteanFect CRISPR Ultra小鼠免疫細胞轉(zhuǎn)染試劑盒——一步到位的基因編輯解決方案
使用便捷：試劑盒中包含陽性對照,，您只需準備sgRNA即可開展實驗
即開即用：所有組分已優(yōu)化配比，無需繁瑣調(diào)試
高效可靠：標準化流程確保實驗結(jié)果穩(wěn)定可重復(fù)
全·程無·憂：提供詳細操作指南和一對一技術(shù)支持
ProteanFect 助您輕松實現(xiàn)小鼠免疫細胞的精準基因編輯,。如需了解更多技術(shù)細節(jié)或產(chǎn)品信息,，可聯(lián)系華雅干細胞。
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