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在生物醫(yī)學(xué)研究中,，液相蛋白定量檢測是不·可或·缺的環(huán)節(jié),。然而，傳統(tǒng)檢測技術(shù)大多只能針對單一指標(biāo)進行分析,，若需同時檢測多個指標(biāo),，則需大量樣本分批檢測，操作繁瑣且各指標(biāo)間差異較大,。對于樣本量較少或需對比各指標(biāo)的研究者而言,，傳統(tǒng)技術(shù)難以滿足需求。例如,，在細胞培養(yǎng)上清或血清中,，細胞因子含量較低，常低于常規(guī)檢測方法的下限,，使用Western Blot等常規(guī)蛋白檢測方法難以奏效,。為此，BD-Pharmingen公司開發(fā)了一種基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術(shù)——CBA（Cytometric Bead Array,，細胞因子微球檢測技術(shù)）,，為這一難題提供了有效解決方案。

CBA技術(shù)原理CBA是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法,，可同時對單個樣品中的多個指標(biāo)進行檢測,。BD公司借助流式細胞儀對熒光信號具有級數(shù)放大的特性，將待測的可溶性因子附著于近似細胞直徑的微粒上,，從而實現(xiàn)對樣品中多種可溶性因子的檢測,。其基本原理與ELISA相似，通過微小,、分散的顆粒捕獲液體待測物,，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治"結(jié)構(gòu)的顆粒——待測物復(fù)合體所散發(fā)的熒光,，進而測定待測物的數(shù)量。

在CBA檢測過程中,，每個微球大小一致,，帶有特定熒光強度，并包被有特異性捕獲抗體,，為待測物提供類似ELISA孔板的捕獲表面,。當(dāng)微球與待測樣品溶液混合后,，微球上的特異性抗體與樣品中的相應(yīng)抗原或蛋白結(jié)合，隨后加入熒光標(biāo)記的檢測抗體,，形成“三明治"夾心復(fù)合物,。通過流式細胞儀，CBA可對特異性目的蛋白進行檢測,。每種微球攜帶不同強度的紅色熒光,，通過流式細胞儀的FL3通道檢測微球熒光強度差異實現(xiàn)目的蛋白的定性；檢測抗體帶有PE熒光素標(biāo)記,，在FL2通道檢測,，通過檢測抗體的PE熒光強度實現(xiàn)目的蛋白的定量。

CBA技術(shù)特點CBA融合了ELISA和細胞流式技術(shù)的優(yōu)點,，是一種先進的液相蛋白檢測技術(shù),。與ELISA相比，CBA的捕獲微球呈懸浮態(tài),，能更高效地捕獲被分析物,；同時，它還具備流式細胞儀寬范圍熒光檢測的特點,，對樣本需求量少,，檢測快速且準(zhǔn)確。以下是CBA的主要技術(shù)特點：

1.多重檢測能力：CBA最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行定量,，大大提高了檢測效率,，滿足了復(fù)雜樣本分析的需求。

2.樣本需求量少：僅需50μL溶液即可進行一次檢測,，這對于樣本量有限的研究具有重要意義,，減少了樣本采集的困難和成本。

3.高靈敏度,、寬檢測范圍和良好重復(fù)性：CBA的分析靈敏度高達2.8pg/mL,，檢測范圍可達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線,。這種技術(shù)通過抗體的熒光強度對目的蛋白定量,，避免了ELISA中酶聯(lián)放大可能產(chǎn)生的假陽性結(jié)果，提高了檢測的準(zhǔn)確性和可靠性,。

4.靈活的檢測對象組合：傳統(tǒng)的CBA試劑盒通常包含固定的6個指標(biāo),，形式較為固定。為了滿足不同客戶的實際需求和研究興趣,，BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set,。這一創(chuàng)新改變了傳統(tǒng)CBA試劑盒的固定形式，使其成為自由組合、靈活搭配的“自助餐",。研究者可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標(biāo),，最多能同時檢測75個指標(biāo)。除了繼承CBA試劑盒的優(yōu)勢外,，CBA Flex Set還配備了獨立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software）,，并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進行操作。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間,，進一步豐富了CBA產(chǎn)品線,，涵蓋了免疫、細胞信號傳導(dǎo),、細胞凋亡等多個領(lǐng)域的蛋白定量分析,。

5.操作簡便，省時省力：CBA技術(shù)采用芯片式集成測定,，所有檢測只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出每種待測蛋白的濃度,。操作流程簡單，整個檢測過程僅需3.5小時,，可對樣本進行實時分析,，顯著縮短了檢測時間，提高了檢測效率,，使研究人員能夠更快速地獲得實驗結(jié)果,，加速研究進程。

總之,，CBA技術(shù)以其多重檢測能力,、低樣本需求、高靈敏度,、寬檢測范圍,、良好重復(fù)性、靈活的檢測對象組合以及簡便的操作流程等優(yōu)勢,，為液相蛋白定量檢測領(lǐng)域帶來了革新,，為生物醫(yī)學(xué)研究提供了強大的技術(shù)支持。

產(chǎn)品應(yīng)用
自CBA上市以來,，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域,。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清,、唾液,、細胞培養(yǎng)上清等樣本中細胞因子、炎癥因子的水平的分析,。CBA還用于細胞信號傳導(dǎo)中磷酸化蛋白,、凋亡相關(guān)蛋白分析,，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究,，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發(fā),，疫苗研究,，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。

CBA產(chǎn)品信息見下表:

2 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品