產(chǎn)品名稱：Cygnus F410 大腸桿菌宿主細胞ELISA檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：F410（96T/盒）
保存溫度：2～8℃
產(chǎn)品介紹：
Cygnus F410 E.coli HCP 大腸桿菌宿主細胞ELISA檢測試劑盒主要設計用于檢測產(chǎn)物重組表達過程中大腸桿菌宿主細胞污染,，試劑盒使用的多克隆抗體對數(shù)百種HCPs具有反應性,。 Cygnus F410 E.coli HCP 大腸桿菌宿主細胞ELISA檢測試劑盒檢測濃度可達到 0.2ng/mL。
ELISA檢測相比Western Blot：Western Blots檢測過程復雜并需借助程序分析結果,。而且,，Western Blot本質上是定性分析，不能得到定量結果,，檢測靈敏性也受到樣本體積的限制,。Western Blot在下游純化過程中檢測產(chǎn)物HCPs缺乏靈敏度和特異性。而微量滴定板ELISA檢測可以克服上述限制,。ELISA具備高度靈敏性,，可獲得半定量結 果，是純化工藝,，過程控制,，常規(guī)質量檢測選擇。
產(chǎn)品使用時一定要做好保護措施：0.5M硫磺酸有強腐蝕性,，要避免接觸眼睛,、皮膚和衣物。檢測前所有試劑都要平衡到室溫,。
檢測原理
大腸桿菌E. coli檢測是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測,。樣本中包含的E. coli HCPs蛋白與標記有抗-E. coli 抗體的辣根過氧化物酶同時反應，反應發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-E. coli 蛋白抗體的微量滴定板中進行,。免疫反應構成為夾層式結構：固相抗休-HCP-酶標記抗體,。反應結束后清洗微量滴定板去除未結合反應物。添加TMB作用底物 反應,。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度,，水解物濃度與E. coli HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線,，根據(jù)讀數(shù)可以計算出E. coli HCPs蛋白含量,。
檢測過程：
取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl Cygnus F410 大腸桿菌宿主細胞ELISA檢測試劑盒標準液，對照物和樣品至待測孔→移取100µl anti-E. coli:HRP(#F411)至每孔→密封滴定板,，搖床室溫溫育90分鐘,，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液,，350µl清洗緩沖液清洗4次→加 100µl TMB 作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘,，不需搖床→加100µl反應終止液(#F006)→分光光度計450/650nm讀數(shù)
檢測結果分析：
Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 標準液(0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL)可用于制作標準曲線,，標準液濃度相當于免疫反應HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線,。Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 檢測結果數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線,，例如點到點，三次樣本函數(shù),，或四參數(shù)邏輯曲線,。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差,。也可以手工繪圖,，Y軸標注吸光值，X軸標注濃度,。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度,。（操作時每一濃度標準液都要滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值,，樣品也需計算平均吸光值）,。
Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 組成成份：
● Anti- E. coli:HRP(辣根過氧化物酶標記) 1x12mL F411(Product#)
● Anti- E. coli coated微量滴定板 12x8孔 F412
● E. coli HCP標準液(0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL) 1mL/瓶 F413
● Stop Solution終止液(0.5M硫磺酸) 1x12mL F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨) 1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍濃縮) 1x50mL F004
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