1、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損,?
將血清從冷凍箱取出后,,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是,融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,,并避免反復(fù)凍融,。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),,請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月,。若一次無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),,再放回冷凍,。
2、血清中包含絮狀沉淀,,它們是什么,,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性,,不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,,離心血清(400g,,1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾),。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,,沉淀會(huì)自然消失。
3,、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀,?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,,減少沉淀的發(fā)生,。
(2)血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),,使溫度與成分均一,。
(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。
(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,,從而影響血清的品質(zhì)。
(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,,若非必要,,可以無(wú)須做此步驟。
(6)若必須做血清的熱滅活,,請(qǐng)遵守56℃,,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻,。溫度過(guò)高,,時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多,。
4,、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長(zhǎng)期保存嗎,?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解,。
5,、為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,,刺激平滑肌收縮,,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究,,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),,推薦使用熱滅活血清,。
6,、 有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會(huì)使此沉淀物更增多,,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,,可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!
8,、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理,?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,,首先,,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,,然后,,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染,,微生物則會(huì)大量繁殖,,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁,。污染包括細(xì)菌污染,、支原體污染等,。如果在鏡下觀察細(xì)胞,,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,,沒有任何變化,,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老,,破碎的細(xì)胞殘骸,;
(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果,;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng),;
(4)配制培養(yǎng)基的水
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