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溶血性鏈球菌實(shí)時(shí)熒光檢測系統(tǒng)
溶血性鏈球菌實(shí)時(shí)熒光檢測系統(tǒng)
Real-time fluorescence detection system for hemolytic streptococcus
2.1產(chǎn)品簡介
溶血性鏈球菌實(shí)時(shí)熒光檢測系統(tǒng)是指通過熒光染料或熒光標(biāo)記的 特異性探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,，實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)過程的儀 器,。結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，計(jì)算待測 樣品模板的初始濃度,。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒 光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,。后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模 板進(jìn)行定量分析,包括TaqMan熒光探針和SYBR熒光染料。PCR 能對(duì)特定基因或物種的豐度進(jìn)行相對(duì)定量,，比較不同處理或樣品間 的差異,，如基因拷貝數(shù)、表達(dá)量來硏究基因表達(dá)對(duì)處理的響應(yīng),， 同時(shí)可以獲得PCR擴(kuò)增效率等信息.
產(chǎn)品功能
溶血性鏈球菌實(shí)時(shí)熒光檢測系統(tǒng)是特異性靶基因檢測與定量的一體化平 臺(tái),。快速型實(shí)時(shí)定量PCR儀將PCR熱循環(huán),，熒光檢測和各種應(yīng)用分 析軟件結(jié)合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò) 增產(chǎn)物逐漸增加的情況,。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果, 無需凝膠電泳分析，無需純化PCR產(chǎn)物,，無需進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)操作。
2.2試劑介紹
技術(shù)特點(diǎn)：
◆準(zhǔn)確可靠,，臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)>1000例,，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測序法比對(duì)，結(jié)果*性大于99%,。
◆高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA,。
◆快速：整個(gè)檢測流程只需3小時(shí)。
◆產(chǎn)品僅用于科研簡便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑,，使體系配置操作簡便,。
◆防污染
◆高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需* 配對(duì),，才能延伸,。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對(duì)，在延伸中產(chǎn)生熒光,。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
◆ 即開即用,，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
◆ 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
◆ 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
◆ 一管式熒光定量PCR檢測,，避免后續(xù)污染,。
◆ 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
使用方法：
一,、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
◆ 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
◆ 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為7,，6，5,，4,，3，2,。
◆ 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,，下同)。
◆ 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
◆ 換槍頭,，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照,。放冰上待用。
◆ 換槍頭,，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照,。放冰上待用,。
◆ 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用,。
二,、樣品DNA的制備
◆ 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),，一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,，10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC,。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL,。
◆ 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三,、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行)
◆ 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照,。如果做2-3次重復(fù),，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
產(chǎn)品主要參數(shù)
主要特點(diǎn)：
可檢測固態(tài),、液態(tài),、表面、膏狀,、漿狀樣本;
樣本在檢測時(shí)無需任何的前處理過程,，直接丟入檢測瓶即可;
可自動(dòng)控制孵育溫度和孵育時(shí)間
檢測樣本只需1ml/1g;同一溫度下可同時(shí)檢測8個(gè)樣品;
靈敏度高達(dá)可檢測到1目標(biāo)微生物;特異性高達(dá)99.999%;
獨(dú)立、持續(xù)的檢測并記錄瓶中的微生物數(shù)量(CFU)
簡單三個(gè)操作步驟,，傻瓜型，無需專業(yè)操作人員;
儀器便攜式,，可隨時(shí)隨地進(jìn)行檢測,、100%定量分析，并可直接連接電腦出定量分析檢測報(bào)告,。
RVL微生物檢測瓶
檢測范圍：
活細(xì)菌總數(shù)
大腸菌群/大腸桿菌/大腸桿菌O157, O111, O104...等
腸道桿菌科
金黃色葡萄球菌
銅綠假單胞菌;綠膿桿菌
沙門氏菌
李斯特菌
腸球菌
酵母菌
應(yīng)用范圍：
衛(wèi)生控制：
-食品(HACCP)
-廚房,、工具、表面(HACCP)
-水質(zhì)
-(CDC)疾病控制,、進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫
-藥品及 化妝品
與我們的生活息息相關(guān),，例如：
咖啡館、餐廳
水源檢測,、制水廠
分析實(shí)驗(yàn)室和HACCP診斷
農(nóng)產(chǎn)品及相關(guān)加工公司
藥廠,、藥房、化妝品廠
環(huán)境監(jiān)測機(jī)構(gòu)
水配送公司
消費(fèi)者保護(hù)團(tuán)體,、工商管理機(jī)構(gòu)
室內(nèi)空調(diào)調(diào)節(jié)公司
集傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法優(yōu)點(diǎn)于一身:
-培養(yǎng)皿法
-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析)
-免疫法(抗原搜尋)
-基因法(基因搜尋)
檢驗(yàn)樣本無需任何前處理
-液態(tài)樣本,，固態(tài)樣本和表面樣本均無需前處理
定性和定量分析
-搭配檢測機(jī)：100%的定量分析
-肉眼判讀：定性或半定量分析
簡單便捷
-簡單的三個(gè)步驟得到檢測結(jié)果
檢驗(yàn)迅速
-是傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法速度的2～5倍
高靈敏性
-可以檢測到1目標(biāo)微生物(理論極值)
高特異性
-特異性高達(dá)99.999%(理論極值)
檢測瓶就是實(shí)驗(yàn)室
-微生物檢測瓶隨時(shí)可用
-未受過嚴(yán)格專業(yè)訓(xùn)練的檢測人員也可隨時(shí)隨地進(jìn)行檢測
使用后安全丟棄
-和過期藥物同樣處理
微生物檢測瓶尤其能應(yīng)用于軍事、大型展會(huì)等等的食品快速檢測
(微生物快速檢測)
RVL微生物快速檢測瓶
微生物快速檢測儀RVLM :
-簡單,、便捷,，100%定量分析
-在同一溫度下可容納8個(gè)樣品。
-可自動(dòng)控制孵育溫度和孵育時(shí)間
-獨(dú)立、持續(xù)的檢測并記錄瓶中的微生物數(shù)量(CFU)
使用后無菌處理
-按下RVL微生物檢測瓶的瓶蓋上方
-放心安全丟棄(與過期藥物同樣處理)
若沒有RVLM微生物檢測儀：
-充分溶解混合后,，放入恒溫器孵育
(在適當(dāng)溫度下孵育適當(dāng)時(shí)間,，請(qǐng)查上表)
-肉眼判讀定性或半定量分析結(jié)果
以大腸菌群為例：
若菌落數(shù)>108CFU/ml：2小時(shí)內(nèi)顏色即變成黃色;
若菌落數(shù)<102CFU/ml：14小時(shí)內(nèi)顏色不會(huì)變成黃色;
若菌落不存在：18小時(shí)后顏色仍保持開始顏色
或其他中間色(不變成黃色)
簡單三個(gè)步驟得到100%定量檢測結(jié)果：
一步：放入樣本
-打開瓶蓋，加入11ml無菌水
-放入液態(tài)(固態(tài)/表面)樣本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)
-蓋緊瓶蓋
第二步：搖動(dòng)瓶子直到溶劑充分溶解或混合
(充分溶解或混合如右圖所示)
-若使用振蕩器,，需時(shí)20秒左右;
或用手用力搖,，需時(shí)2~3分鐘左右。
第三步：在適當(dāng)時(shí)間判讀結(jié)果(請(qǐng)查左表)
-使用RVLM微生物檢測儀：
-充分溶解混合后立即放入檢測儀
-得到100%定量分析結(jié)果