產(chǎn)品名稱：WinSera®優(yōu)級免分裝胎牛血清

貨號：FBS50-WS-002

規(guī)格：50ml*10

產(chǎn)品特點：

1、50ml規(guī)格,，無需分裝,，降低污染可能性。

2,、三次0.1μm無菌過濾,。

3、高品質(zhì)低內(nèi)毒素,，適合多種細胞培養(yǎng)

4,、高性價比，批次差異小，質(zhì)量穩(wěn)定,。

WinSera胎牛血清,，50ml規(guī)格便捷裝，遠離分鐘污染風險,，即取即用,。

§細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正常現(xiàn)象,，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象,，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度,。如果出現(xiàn)了細胞團,，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中,，靜置20 min左右,，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團),。

§細胞內(nèi)有空泡,，是否是正常現(xiàn)象?

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,，Ishikawa及一些耐藥株等),，這個是正常現(xiàn)象,。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度,，控制消化,，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多,，則可能細胞代次較高,，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞,。

§細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度,，對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太稀;或者生長較快的細胞,，傳代較密,，細胞嚴重堆疊生長)。

§細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。

§培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度,。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時,，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細胞,。

§CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染,。

§細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因,。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞,，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞,，傳代比率1:3-1:8為宜,，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。因此選擇正確的,，靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

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血清使用需要注意的問題

（一）被誤判為污染的“小黑點"

經(jīng)過熱處理的血清,，往往沉淀物會增多,，而這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是污染物，常常會讓研究者誤以為血清遭到污染,。然而,，把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物進一步增多,，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增,。

我們的經(jīng)驗是拿到鏡下去觀察是否為細菌狀或真菌狀形態(tài)。還有就是做無菌培養(yǎng),，取一點血清在培養(yǎng)皿中,，在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)幾天，觀察沉淀物是否有變化,。一般情況下,，這些沉淀物并不會影響血清的正常使用，Lab里往往用0.22μM的濾膜過濾一下就繼續(xù)使用了,。

（二）解凍血清

解凍血清時,，請遵循推薦的分步解凍方法（-20℃→4℃→室溫）。實驗表明,，如果血清解凍溫度過高（如-20℃→37℃）,，很容易產(chǎn)生沉淀,。解凍血清時，請隨時搖勻,，使溫度和成分均勻,，減少沉淀的發(fā)生。請不要長時間將血清放置在37℃環(huán)境中,，如果放置時間過長,，血清會變得混濁，血清中的許多不穩(wěn)定成分會受到破壞,，從而影響血清的質(zhì)量,。血清的熱滅活很容易引起沉淀物的增加，我們認為這一步是不必要的,。如需對血清進行熱滅活,，請遵循56℃、30min原則,，隨時搖勻。如果溫度過高,、時間過長或搖晃不均勻,，沉淀物就會增加。

血清中出現(xiàn)沉淀物的原因有很多,，但最常見的是血清中脂蛋白的變性,，解凍后血清中還會存在纖維蛋白（形成凝塊的蛋白質(zhì)之一），這也是產(chǎn)生沉淀物的主要原因之一,。然而,，這些絮狀沉淀物雖然并不影響血清本身的質(zhì)量，但有可能會被誤判為污染物,。如果要去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝在無菌離心管中，以1200rpm的速度離心,，然后將上清液加入培養(yǎng)基中進行過濾,。

（三）保存血清

避免血清出現(xiàn)非污染性沉淀物的最好方法就是減少血清反復(fù)凍融的次數(shù)，所以血清少量分裝凍存是一個好方法,。建議血清保存在-20～-5℃之間,。如果以4℃保存，不要超過一個月,。如果一次不能用完一瓶,，建議將血清分裝到無菌離心管中，然后再凍存,。

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