恒河猴腎細胞MA-104

MEM+10%FBS+1%P/S  

貼壁生長

細胞死亡及生長異常

1,、首先講一下細胞生長緩慢的原因：

a)更換了血清或者培養(yǎng)基，細胞需要一段時間適應(yīng)一下,；

b)由于細胞的特殊種類,，培養(yǎng)基中缺少某些生長因子；

c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細菌污染,；

d)傳代的時候細胞密度過低,；

e)細胞狀態(tài)老化；

f)支原體污染,。

2、解決上述問題的方法：

a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養(yǎng)基,，可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些,，然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例，25%,、50%,、75%到100%，傳代3-5次后,，讓細胞慢慢適應(yīng),。

b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染，可以先不加抗生素,，觀察細胞狀態(tài),。

c)增加細胞的接種密度。

d)發(fā)現(xiàn)細胞老化的時候,，及時更換新的細胞,。

e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿,，及時清潔消毒孵箱,。

3、造成細胞死亡的原因：

a)細胞消化過度；

b)沒有及時換液,，營養(yǎng)成分消耗殆盡,；

c)如果前一天細胞的狀態(tài)很好，換液之后就全死了,，應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題,。

4、如何判定細胞是否發(fā)生支原體污染：可以選用直接培養(yǎng)法,、熒光染色或PCR方法檢測,，比較常用的是PCR。當(dāng)細胞發(fā)生支原體污染時,，原則上是能夠去除支原體的,，但是整個過程耗時耗力，還要考驗個人操作能力,。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,，建議發(fā)現(xiàn)污染時立刻棄掉，重新培養(yǎng),。

5,、如果孵箱中只是某種細胞持續(xù)性大量死亡，而其他細胞狀態(tài)都沒問題的話,，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌,，遇到這種情況，小六兒也不知道該怎么做,，只能是先停一段時間看看,。。,。,。。,。

5,、其他注意事項：每個星期都要更換孵箱底盤中的水（紫外照射后超純水）；每兩周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后,，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍（都用超純水配制）,；可以在孵箱底部放一個燒杯，里面放入飽和硫酸銅,，可以抑制霉菌生長,。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情況很嚴重,，建議不要使用,。

人膽囊上皮細胞永生化

人膽囊上皮細胞永生化+GFP

人前庭鞘膜瘤細胞永生化

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細胞永生化

人胰腺癌細胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細胞永生化

人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞永生化

人主動脈內(nèi)皮細胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細胞永生化

人肝竇內(nèi)皮細胞永生化

人腸癌細胞永生化

人頸靜脈球瘤細胞永生化

人副神經(jīng)節(jié)瘤細胞永生化

人腸息肉上皮細胞永生化

人原代聽神經(jīng)瘤細胞永生化

人原代髓核細胞永生化

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化

人眼瞼皮脂腺癌細胞永生化

人主動脈瓣膜間質(zhì)細胞永生化

人睪丸支持細胞永生化

人骨骼肌細胞永生化

人卵巢癌細胞永生化

人真皮成纖維細胞永生化

人原代甲狀旁腺主細胞永生化

人原代乳腺上皮細胞永生化

人原代乳腺癌成纖維細胞永生化

人原代軟骨細胞永生化

人臍靜脈內(nèi)皮原代細胞+GFP 原代細胞+GFP

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

小鼠肺成纖維細胞永生化

小鼠附睪脂肪干細胞永生化

小鼠腎小球系膜細胞永生化

小鼠胰腺星狀細胞永生化

小鼠脂肪干細胞永生化

麝香鼠原代乳腺上皮細胞永生化

小鼠骨髓巨噬細胞永生化

小鼠角膜上皮細胞永生化

恒河猴腎細胞MA-104

細胞復(fù)蘇

細胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶",，復(fù)蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶,，對細胞造成損害。

復(fù)蘇準備

?打開水浴鍋加熱至37℃,。

? 超凈臺上放好離心管（一般15ml的）,，細胞培養(yǎng)瓶，移液管,，紫外滅菌至少20至30分鐘,，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。

?37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細胞的培養(yǎng)液,，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液,，根據(jù)細胞情況選擇。

?向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液,，從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞,，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中,，800-1000rpm下離心5min,，棄上清，加適量*培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細胞后轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)瓶中,，輕晃使瓶底液體分散均勻,，標好細胞名稱、代數(shù),、復(fù)蘇日期,，顯微鏡下觀察后放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中,。一般貼壁細胞過夜即可貼壁，換液和傳代時間根據(jù)不同細胞生長情況而定,。

細胞復(fù)蘇注意事項

?復(fù)蘇時動作要快,，盡量減少胞內(nèi)形成冰晶，影響復(fù)蘇后細胞活率,。

? 融化時盡量不要碰到管口,，以免容易造成污染。

?若一次性需要復(fù)蘇細胞很多,，可以分批水浴解凍,，防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。

?若需要同時復(fù)蘇好幾種細胞,，提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標記,，或記住自己擺放的位置,，不要弄混亂。