SIGMA特級胎牛血清價格

產(chǎn)品名稱：特級胎牛血清

貨號：F8687-500ML  F2442-500ML

品牌：SIGMA

規(guī)格：500ml

產(chǎn)品名稱：特級胎牛血清

貨號：0500

規(guī)格：500ml

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如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞,？能用蛋白酶消化嗎？

我們推薦使用脫落細(xì)胞的方法,，此技術(shù)破壞性最小,，生活力最高。通過使用巴斯德吸液管,，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動,。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在絕對必要的情況下,，才使用胰消化細(xì)胞,。

38.胰消化一個T25瓶的sf9細(xì)胞：

1. 去除培養(yǎng)基。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞,，去除PBS,。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）。

4. 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動,。

5. 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液,，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,，移入同一錐形管中,。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰的活性。）

6. 離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞,。去除培養(yǎng)基,。

7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代,。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時,，肝素的使用量是多少？

為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成,，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液,。

40.在重新凍存sf9細(xì)胞前，它可以傳多少代,？隨著傳代的次數(shù)的增加,，它的感染能力會降低嗎？

通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后,，應(yīng)該返回凍存,。無論什么時候計數(shù)時，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力,。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,，細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,，它們的感染力將不在是有效的,。

41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，在放置幾天后顏色變紫?

這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升,。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）,。

42. 細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用,？

如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,，培養(yǎng)基可以正常使用,，如果出現(xiàn)沉淀,，只能丟棄這些培養(yǎng)基。

43. 無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎,？

當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素,。在無血清培養(yǎng)條件下,，抗生素不被滅活，可能對于細(xì)胞達(dá)到毒性水平,。

44. 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

45.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎,？

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,，將會影響它的性能,。

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SIGMA特級胎牛血清價格保存血清最好方法是什么？

   我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,。但是若存放于4℃時,，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi),，再放回冷凍。反復(fù)凍融會對血清的品質(zhì)造成不良影響,。

② 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損,？

   我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解,，然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。

③ 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理？

   血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲存在2-8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素,、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會聚集成團(tuán)，形成絮狀沉淀或外觀混濁,；在運輸過程中,，由于時間較長，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉淀,，但這些都不影響血清性能,。

   若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因為它可能會阻塞過濾膜,。

④ 何謂熱滅活？

   一般是以56℃,，30分鐘來處理已解凍的血清,，因為此加熱步驟，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞,，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用,，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活,。

⑤ 有必要作熱滅活嗎,？

   實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清質(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清,，沉淀物的形成,，會顯著增多，這些沉淀物在導(dǎo)致顯微鏡下觀察,，像是“小黑點",，常常會讓研究者認(rèn)為血清遭受污染，而把血清放進(jìn)37℃環(huán)境中,，又會使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

   因此我們建議您,，若非必須,，您可以不做熱滅活處理血清,。這樣，不僅節(jié)省您寶貴時間,，更確保血清的質(zhì)量,。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時才推薦做熱滅活,。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇,。

⑥ 如何減少沉淀物的產(chǎn)生？

   我們建議您在使用血清的時候,，注意下列的操作：

   ● 解凍血清時,，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時,，改變的溫度太大（如-20℃至37℃）,，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

   ● 解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。

   ● 請勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久，血清會變得混濁,，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。

   ● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，則毋須做此步驟,。

若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時搖晃均勻,。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻,，都會造成沉淀物的增多,。