ScienCell胎牛血清

產(chǎn)品名稱：特級(jí)胎牛血清

貨號(hào)：0500

規(guī)格：500ml

WINSERA® Fetal Bovine Serum 胎牛血清目錄如下：

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如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞？能用蛋白酶消化嗎,？

我們推薦使用脫落細(xì)胞的方法,，此技術(shù)破壞性最小，生活力最高,。通過使用巴斯德吸液管,，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動(dòng)。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶,。只有在絕對(duì)必要的情況下,，才使用胰消化細(xì)胞。

38.胰消化一個(gè)T25瓶的sf9細(xì)胞：

1. 去除培養(yǎng)基,。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞,，去除PBS。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）,。

4. 37 ℃孵育5到10分鐘,。在儀器下檢測(cè)看到5分鐘后它們正在向上移動(dòng),。

5. 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管,，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰的活性,。）

6. 離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞,。去除培養(yǎng)基。

7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞,。傳代,。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，肝素的使用量是多少,？

為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液,。

40.在重新凍存sf9細(xì)胞前,，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加,，它的感染能力會(huì)降低嗎,？

通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后，應(yīng)該返回凍存,。無(wú)論什么時(shí)候計(jì)數(shù)時(shí),，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時(shí)左右加倍,，細(xì)胞仍然可以使用,。如果活力和加倍時(shí)間下降，它們的感染力將不在是有效的,。

41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,，在放置幾天后顏色變紫?

這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時(shí)，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升,。您可以在使用前松開瓶口,，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來(lái)校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）,。

42. 細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,，可否繼續(xù)使用？

如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生,。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用,，如果出現(xiàn)沉淀,，只能丟棄這些培養(yǎng)基,。

43. 無(wú)血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？

當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí),，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%,。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無(wú)血清培養(yǎng)條件下,，抗生素不被滅活,，可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。

44. 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,，可長(zhǎng)期保存嗎,？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解,。

45.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,，將會(huì)影響它的性能。

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人源 子宮成纖維細(xì)胞

人源 真皮成纖維細(xì)胞

人源 角質(zhì)形成細(xì)胞

ScienCell胎牛血清保存血清最好方法是什么,？

   我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,。但是若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,。若您一次無(wú)法用完一瓶,，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o(wú)菌容器內(nèi)，再放回冷凍,。反復(fù)凍融會(huì)對(duì)血清的品質(zhì)造成不良影響,。

② 如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？

   我們建議您將血清從冷凍箱取出后,，先置于2-8℃冰箱使之溶解,，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。

③ 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理,？

   血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會(huì)聚集成團(tuán),，形成絮狀沉淀或外觀混濁,；在運(yùn)輸過程中，由于時(shí)間較長(zhǎng)，所以往往有少許解凍,，因此也可能稍有沉淀,，但這些都不影響血清性能。

   若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。

④ 何謂熱滅活,？

   一般是以56℃,，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。

⑤ 有必要作熱滅活嗎,？

   實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜遒|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。而經(jīng)過熱滅活的血清，沉淀物的形成,，會(huì)顯著增多,，這些沉淀物在導(dǎo)致顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)",，常常會(huì)讓研究者認(rèn)為血清遭受污染,，而把血清放進(jìn)37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。

   因此我們建議您，若非必須，您可以不做熱滅活處理血清,。這樣,，不僅節(jié)省您寶貴時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量,。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞,，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)才推薦做熱滅活。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇,。

⑥ 如何減少沉淀物的產(chǎn)生,？

   我們建議您在使用血清的時(shí)候，注意下列的操作：

   ● 解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫）,，若血清解凍時(shí)，改變的溫度太大（如-20℃至37℃）,，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

   ● 解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

   ● 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。

   ● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，則毋須做此步驟,。

若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多。