ScienCell胎牛血清（貨號0500）

貨號：0500

規(guī)格：500ml

1,、一般拿到細胞后,，應該注意什么?

收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X,，200X各兩張),，排除細胞本身污染的情況,。

2,、何時須更換培養(yǎng)基?

視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基,。

3,、細胞何時進行傳代較好?

一般情況下細胞生長至*匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),，但有接觸抑制的細胞,，在匯合前就必須進行傳代,，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化,。

4,、貼壁細胞如何進行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS,，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞,，顯微鏡下觀察，待細胞變圓,，細胞間隙明顯,，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右*培養(yǎng)液混勻終止消化,，將細胞小心吹打下來,，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸,，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,，1:3-1:6，1:6-1:8),，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml,，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),。

5,、懸浮性細胞應如何傳代處理?

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可,，若培養(yǎng)液太多時,，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min,。棄上清,，細胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),，每T25瓶加*培養(yǎng)液至4-5 ml,，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),。有些懸浮細胞趨于成團生長,，此時細胞生長狀態(tài)良好，當補液時,，需避免反復吹打,。

6、貼壁細胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時,，易造成培養(yǎng)基中細胞碎片增多,，黑渣子增多，常規(guī)細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化,，對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化,，細胞密度過高超過80%時，采用分步消化法,。胰酶儲存在–20°C,，解凍在4°C進行，第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,，保存于–20°C,，避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會,。

7,、如何控制胰酶消化時間?

胰酶消化的程度是細胞培養(yǎng)中的一個關鍵步驟：消化過度細胞碎片增多，黑渣子增多,，細胞會成片脫落,，嚴重影響細胞活性，并有部分細胞漂浮,，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,，反復吹打同樣也會損傷細胞活性。

不同細胞對消化液的敏感性不同,，胰酶消化的時間也會有差異,。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA,，胰酶的儲存時間,，胰酶的儲存溫度，是否反復凍融,，消化加入的胰酶體積,，消化溫度及細胞的密度有關。消化對于新購買的細胞,，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間,，可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓，記錄最佳消化時間,，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可,。

8、細胞離心下來的離心速率應為多少?

細胞傳代或凍存時欲回收細胞,，其離心速度一般為800-1000 rpm/min,，室溫離心5-8分鐘,，轉(zhuǎn)速過高,，將造成細胞破裂死亡,。

9、如何區(qū)分活細胞和死細胞?

顯微鏡下觀察：活細胞中間透亮,，飽滿,，有光澤，死細胞較暗,。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力,。

10、如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞?

用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000 個/毫升,，在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液,。輕輕混勻，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞,?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞,，注意計數(shù)需在加入臺盼藍10min內(nèi)完成,。有細胞計數(shù)儀的，可直接用計數(shù)儀進行,。

11,、二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?

二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。

12,、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,，用EDTA清洗細胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。

13,、可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能,。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,，細胞大都無法立即適應,，易造成細胞狀態(tài)不好，最終造成細胞無法存活,。

14,、可否使用與原先不同的血清種類?

不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響,。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活,。

15,、細胞為何生長不均勻?

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻,，但在細胞貼壁前,，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少,，培養(yǎng)箱擱板表面不平整,，這些因素會導致細胞生長不均勻。

16,、購買的細胞死亡或細胞存活率不佳

研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳,。運輸過程對細胞有嚴重影響,。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,，加以洗滌細胞和離心,。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤,。細胞置于–80°C太久,。

人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC

人肝癌細胞 smmc-7721

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19

人肝癌細胞 snu-1

人肝癌細胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化細胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤細胞 SW982 [SW-982]

人結腸腺癌細胞 SW1116

人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞 SW-13

人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞 SW1353

人胰腺癌細胞 SW1990

人結腸腺癌細胞 SW480

人甲狀腺癌細胞 SW579

人結直腸腺癌細胞 SW620

人結直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP

人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU

人膀胱移行細胞癌 SW780

人膀胱移行細胞癌細胞 T24

人乳腺導管癌細胞 T47D

人膠質(zhì)母細胞瘤 T98G

人食管癌細胞 TE-1

人食管癌細胞 TE-12

人單核細胞白血病細胞 thp-1

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細胞株 TPC-1

人甲狀腺癌細胞 TT

人喉癌細胞 TU212

人喉癌細胞 TU-138

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U118MG（U-118MG）

人成骨肉瘤細胞 U-2 OS

人類星形膠質(zhì)細胞瘤細胞 U251 MG (KO)

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤細胞 U266

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U87MG

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤細胞 U-937

人膀胱移行細胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌細胞 VCAP

人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 WERI-RB-1

人黑素瘤細胞 WM-115

人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞 WPMY-1

人正常肝細胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌細胞系+GFP XWLC-05+GFP

人膽囊癌細胞系 ZJU-0430

人膽囊癌細胞系熒光素酶標記 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌細胞 ZR-75-1

17、細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象,，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象,，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度,。如果出現(xiàn)了細胞團,，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中,，靜置20 min左右,，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

18,、細胞內(nèi)有空泡,，是否是正常現(xiàn)象?

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,，Ishikawa及一些耐藥株等),，這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,，則很可能是細胞狀態(tài)不佳,，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化,，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多,，則可能細胞代次較高,，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞,。

19,、細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,，傳代太稀;或者生長較快的細胞,，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長),。

20,、細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。

21,、培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時,，則應使用5% CO2培養(yǎng)細胞。

22,、CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水,，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染,。

23,、細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因,。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞,，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞,，傳代比率1:3-1:8為宜,，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

24,、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點,，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則,，是否運動,，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則,，做布朗運動,，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的,，也可能是細胞的代謝產(chǎn)物,。如果黑點大小一致，快速移動,，很可能是細菌污染,。

25、如何預防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?

掌握細胞傳代的最佳時機,，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間,，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴格控制水質(zhì)和器皿的清潔。

26,、黑點已經(jīng)產(chǎn)生了,，如何進行處理?

如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄,。其他情況,，可參照以下進行：

如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍,，洗的時候,，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,，再棄去PBS,，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,，去掉低濃度胰酶,，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。

27,、培養(yǎng)用dish,flask是否相同,？

不同廠牌的dish或flask，其所coating的polymer不同,，制造程序亦不同,，雖對大部分細胞沒有太大之影響,，惟少數(shù)細胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。

ScienCell胎牛血清（貨號0500）|干細胞胎牛血清|特級胎牛血清|新西蘭胎牛血清價格|新西蘭胎牛血清說明書......

WINSERA® Fetal Bovine Serum 胎牛血清目錄如下：