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ScienCell胎牛血清(0500)
  • ScienCell胎牛血清(0500)

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更新時間:2024-10-08 15:29:12

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ScienCell胎牛血清(0500)

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規(guī)格:500ml

千舍生物開工大吉,,干細(xì)胞專用,,特級胎牛血清*......

ScienCell胎牛血清(0500

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1. 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基,?

培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEMM199中同樣很容易生長,??傊xMEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng),、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個好的開始,。

2. 何時須更換培養(yǎng)基?

視細(xì)胞生長密度而定,, 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,,按時更換培養(yǎng)基即可。

3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,?

不能,。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),, 造成細(xì)胞無法存活。

4 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類,?

不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。

5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,, 兩者都是指胎牛血清,, FCS 乃錯誤的使用字眼, 請不要再使用,。CS (calf serum) 則是指小牛血清,。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6 培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5 % 10% CO2,?或根本沒有影響,?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2 濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10 % CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時,, 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞,。

7.Hank's 蛋白酶(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱,。原因是什么,?Hank's 蛋白酶(HBS)Earle's蛋白酶(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?

HBSEBS 的主要差別在于氫鈉的水平,Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高,。氫鈉需用高水平的CO2平衡,,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,,溶液會變堿,,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,,需要用Eagles液,,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織,,用Hanks液就可以了,。

8. 細(xì)胞之接種密度為何?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可,。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因,。

9. 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理?

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中, 稀釋細(xì)胞濃度即可,,若培養(yǎng)液太多時,, 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高, 直到無法容納為止,。分瓶時取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度, 重復(fù)前述步驟即可,。

10.冷凍管應(yīng)如何解凍,?

取出冷凍管后, 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍,, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,, 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂,。

11. 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,, 是否應(yīng)馬上去除DMSO

除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外,, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞),, 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題,。

12. 附著性細(xì)胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度,?應(yīng)如何處理?

一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na,。第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,,保存于–20 °C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低,,并可減少污染之機(jī)會,。

13.欲將一般動物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速,?

欲回收動物細(xì)胞,, 其離心速率一般為300xg (1,000rpm)5 - 10 分鐘,, 過高之轉(zhuǎn)速,, 將造成細(xì)胞死亡。

14. 細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?

動物細(xì)胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 90 - 95 % 原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意:由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能,,故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中, 必須使用前先行配制完成,。

15.DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何,?

冷凍保存使用之DMSO 等級, 必須為Tissue culture gradeDMSO (Sigma D2650),,其本身即為無菌狀況,, 第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中, 保存于4°C,,避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì),, 并可減少污染之機(jī)會。若要過濾DMSO,, 則須使用耐DMSO Nylon 材質(zhì)濾膜,。

16.冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 °C 30~60 分鐘→ (-20 °C30 分鐘*) -80 °C 16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 °C 至–80 °C 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 °C 不可超過1 小時,,以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C 冰箱中,,惟存活率稍微 降低一些,。

17. 細(xì)胞欲冷凍保存時, 細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度,?

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial,, 融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。

18.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外,, 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下, 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。

19.應(yīng)如何避免細(xì)胞污染,?

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌,、霉菌,、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當(dāng),、操作室環(huán)境不佳,、污染之血清和污染之細(xì)胞等,。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境,、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染好方法,。

20.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理,?

原則上:直接滅菌后丟棄之,。

當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,,確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,,檢查HEPA過濾器,。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性,因而,,做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟,。

1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度,。

2.分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),,把選擇抗生素加入到每一個孔中,。例如,霉素b推薦下列濃度,,0.250.50,,1.0,,2.04.0,8.0 mg/ml,。

3.每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),,如脫落,出現(xiàn)空泡,,匯合度下降和變圓,。

4.確定抗生素毒性水平后,,使用低于毒性濃度23倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞23代。

5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代,。

6.重復(fù)步驟4,。

7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)46代,確定污染是否以已被消除,。

21.支原體(mycoplasma) 污染的細(xì)胞,,是否能以肉眼觀察出異狀?

不能,。除極有經(jīng)驗之專家外,,大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,無法以其外觀分辨之,。

22.支原體污染會對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響,?

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù), 代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實驗前,,必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。

23. 偵測出細(xì)胞株有支原體污染時,, 該如何處理?

直接滅菌后丟棄,,以避免污染其它細(xì)胞株,。

24. CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之,。

25.為何培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中,, 顏色會偏暗紅色, 且pH值會越來越偏堿性,?

培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中,, 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅,。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,將造成細(xì)胞生長停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時,,可以通入無菌過濾之CO2, 以調(diào)整pH 值,。

26. 各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish,,flask是否均相同?

不同廠牌的dish flask,, 其所coating polymer 不同,, 制造程序亦不同,, 雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響,惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish flask 而有顯著之生長差異,。

27. 購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,, 大都是因為離心過程操作上的失誤,,造成細(xì)胞的物理性損傷, 以及細(xì)胞流失,。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,, 應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。

28.購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因,?

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,, 常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳,。解凍過程錯誤,。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80 °C 太久,。

29. 收到之冷凍管瓶身破裂,,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因,?

冷凍管瓶蓋裂紋,,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),,造成冷凍管裂損,,建議使用小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊,。

30.L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎,?

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,,而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。

31.GlutaMAX-I是什么,?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,?這個二肽有多穩(wěn)定?

GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù),。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用,。

GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,,如果在相同條件下,,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

32.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,?

酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑:中性時為紅色,,酸性時為黃色,堿性時為紫色,。研究表明,,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素),。為避免固醇類反應(yīng),,培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類細(xì)胞時,,用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時,,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。

33.如何用臺盼蘭計數(shù)活細(xì)胞?

用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到2002000/毫升,,在0.1毫升細(xì)胞懸液中加0.1毫升0.4%的臺盼蘭溶液,。輕輕混勻,數(shù)分鐘后,,用血球計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞,。活細(xì)胞排斥臺盼蘭,,因而染成藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞,。

34.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么,?

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,,但是,,如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。

35.二價離子抑制蛋白酶活性嗎,?使用蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?

二價離子的確抑制蛋白酶活性,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,,以便保持抑制蛋白酶的活性。建議蛋白酶處理細(xì)胞前,,用EDTA清洗細(xì)胞,,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。

06,、培養(yǎng)基到底要不要加抗生素?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外,,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。如果是沒有進(jìn)行過細(xì)胞培養(yǎng)的新手,,對無菌技術(shù)沒有信心的,或者提取的原代細(xì)胞,,怕污染的,,可以適量添加抗生素??股乇旧硪彩怯卸拘缘?,有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近,對細(xì)胞多少有傷害,。

07,、培養(yǎng)箱二氧化碳使用比例如何判定?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應(yīng)使用5CO2培養(yǎng)細(xì)胞,。

08,、L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,,而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。

09,、培養(yǎng)基里的粉紅色是什么?

酚紅一般作為培養(yǎng)基中pH值的指標(biāo):當(dāng)培養(yǎng)基呈中性時為紅色,呈酸性時為黃色,,堿性時為紫色,。另外,酚紅可以模擬類固醇激素(特別是雌激素)的作用,。如果要避免類固醇反應(yīng),,可以在無酚紅的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

10,、胰酶里EDTA的作用?

二價的離子會抑制胰酶活性,,所以加入EDTA可以螯合掉CaMg這樣的二價離子,。胰酶也要注意不要反復(fù)凍融,。

11、如何避免細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染?

主要還是考慮無菌環(huán)境,,盡量做好操作臺的滅菌,,別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風(fēng)口,別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻,。這兩個地方霉菌一旦滋生,,那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無法殺滅霉菌,,酒精也不行,,只能用甲醛熏蒸,但是一定要注意安全,。復(fù)蘇的時候,,水浴鍋也需要進(jìn)行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染,,不要急,,能救的就用抗生素救一下,但是一般情況下,,選擇扔掉,。避免交叉感染,要不只能整個實驗室消毒了,。

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人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97L

人胰腺癌細(xì)胞 MIA-PACA-2

人胃癌細(xì)胞 MKN-45

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1R

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1S

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4

人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5(有限細(xì)胞系)

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4


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