Gibco DMEM/F12培養(yǎng)基 （C11330500BT）

 產(chǎn)品名稱：DMEM/F12培養(yǎng)基 

貨號(hào)：C11330500BT 

規(guī)格：500ml

保存溫度：2-8度

蘇州千舍批發(fā)供應(yīng)hyclone液體培養(yǎng)基，Gibco胎牛血清,，無外泌體血清,，Gibco液體培養(yǎng)基，SERANA胎牛血清

蘇州千舍生物對(duì)液體培養(yǎng)基常見問題總結(jié)：

1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好,？

　　要冷藏！,！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),，其溶液的pH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿,，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年,。

　　2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,，及使用方法,。

　　幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求,，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí),，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡,。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）,。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基,。包裝為粉紅色,，-24?C保存。

　　3.液體培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

　　由于,，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4,，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同,，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng),。

　　但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng),。因此，我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí),，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些,。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右,。

　　4.細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎,？

　　不見得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H,、溫度,、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下,，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強(qiáng),。另外，鈣,、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力,。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈,，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：

　?。?）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ,；

　　（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ,。

　?。?）0.25% 胰蛋白酶

　　溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制,。

　　多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液,。

　　Gibco DMEM/F12培養(yǎng)基 （C11330500BT） 購買蘇州千舍細(xì)胞注意事項(xiàng)：

　　一、客戶收到細(xì)胞先不開蓋,，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，顯微鏡下拍細(xì)胞100X,，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況,；

　　收到細(xì)胞未開封,，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞,。

　　二、如為貼壁細(xì)胞,，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時(shí),，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作,；然后打開蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右,，放在離心管里,，然后瓶口過火（嚴(yán)禁直接傾倒），這樣可以保證不污染,，再用10ml的移液管,，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中,，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了,。培養(yǎng)16hr(時(shí)間根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存,。

　　2. 超過80%匯合度時(shí),，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液,，用3ml PBS（不含鈣,，鎂離子）洗1-2次,；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中,，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,，細(xì)胞隨即脫落下來,；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出,，分到新的培養(yǎng)瓶中,，按要求分瓶。

　　三,、如為懸浮細(xì)胞,，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,，吸出上清,，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶,。

　　注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的,，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好,。

　　四、細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

　?。?）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、破損,、漏液等,，重發(fā)；

　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā),；

　?。?）存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，重發(fā),；

　　（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；

?。?）視具體情況而定,。

　　五、細(xì)胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

　 （1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā),；

　?。?）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

　?。?）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā),；

　?。?）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā),；

　?。?）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；

　　（6）視具體情況而定,。

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Gibco液體培養(yǎng)基,， MEM液體培養(yǎng)基,，貨號(hào)：C11095500BT

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Gibco液體培養(yǎng)基,，DMEM低糖培養(yǎng)基 貨號(hào)： C11885500BT

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Gibco液體培養(yǎng)基,，DMEM/F12（1：1）培養(yǎng)基 貨號(hào)：C11330500BT

Gibco緩沖液 PBS7.4 貨號(hào)：C10010500BT

Gibco 胰酶溶液 貨號(hào)：25200-056 100ML

Gibco 胰酶溶液 貨號(hào)：25200-072 500ML

Gibco 雙抗溶液 貨號(hào)：15140-122

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★Gibco培養(yǎng)基：C11995500BT(DMEM高糖）,、C10010500BT（PBS）,、C11875500BT（1640）

★Hyclone培養(yǎng)基:SH30021.01、SH300243.01、SH30265.01,、SH30256.01 

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