日本同仁化學CCK-8試劑盒 Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的檢測細胞增殖,、細胞毒性的試劑盒,，為MTT法的替代方法，試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8,，在美國，歐洲等國家地區(qū)均持有證書,，同仁化學研究所于2006年在中國獲得了WST的注冊商標,。

CCK-8法與普通的MTT法相比，具有顯著特點：

★靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好

★操作簡便，省時省力

★水溶性,，不需要換液,，尤其適合于懸浮細胞

★無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低

★為1瓶溶液,，毋需預制,，即開即用

★適合于高通量藥物篩選

CCK-8用途：藥物篩選、細胞增殖測定,、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏試驗

CCK-8試劑盒在國內科研院所、重點大學,、*醫(yī)院被廣泛應用,，認可度高,，使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇，其中截止08年底SCI影響因子IF＞10分的論文有37篇,，高IF38.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics33, 172 - 176 (01 Feb 2003)]

CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較

CCK-8試劑毒性：CCK-8和其他檢測方法對比可以得出——CCK-8對細胞幾乎無毒性,，不傷害細胞，細胞可重復利用

CCK-8 P公司產(chǎn)品 R公司產(chǎn)品

(操作說明請參考中英文說明書或來電/在線咨詢）

CCK-8 試劑盒利用了同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料,。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中；不需要預配各種成分,。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度,，無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,，生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比,。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高,。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定,，并且對細胞沒有毒性，因此可以長時間孵育,。日本同仁化學CCK-8試劑盒

CCK-8 檢測步驟

1. 向各孔中加入100 μl細胞懸液,。a)

2. 在37℃下預孵育培養(yǎng)板。b)

3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl,。

4. 37℃下孵育,。

5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6. 37℃下孵育1-4小時,。e)

7. 測定450 nm處的OD值,。

a) 使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。

b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預培養(yǎng),。

c) 使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液,。

d) 如果待測溶液有還原性，測定不含細胞,，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ,，如果吸光度相對較大,，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進行檢測,。

e) 白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。

活力計算

細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細胞,、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細胞,、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

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