牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒蘇州千舍生物為您傾情供應，成熟技術,，嚴格工藝流程,，*抗體/抗原，嚴格QC檢測后方可出庫,，請放心購買,！

牛瘦素(LEP) ELISA試劑盒

 一．實驗目的
     酶聯免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA）是在免疫酶技術（immunoenzymatic techniques）的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被，加待測抗體（抗原）, 再加相應酶標記抗體（抗原）,生成抗原（抗體）--待測抗體（抗原）--酶標記抗體的復合物,，再與該酶的底物反應生成有色產物,。借助分光光度計的光吸收計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的定量與有色產生成正比,。

操作注意事項
1）試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。 
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒的準備
1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差,。
2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次。
7）每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒結果判斷與分析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

基本方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,，4℃過夜。次日,，棄去孔內溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡稱洗滌,，下同）。 
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃孵育1小時,。然后洗滌。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。 
　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時，洗滌,。 
　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。 
　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。 
　　6.　結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺,，依據所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號表示,。也可測O•D值：在ELISA檢測儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對照孔調零后測各孔O•D值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。