WRL68人正常肝細胞

MEM+10%FBS

貼壁

上皮細胞樣

細胞培養(yǎng)基本知識

一般拿到細胞后,，應(yīng)該注意什么？

收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X,，200X各兩張）,，排除細胞本身污染的情況。

02何時須更換培養(yǎng)基,？

視細胞生長密度而定,，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。

03細胞何時進行傳代較好,？

一般情況下細胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代,，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密（也就是常說的長老了），但有接觸抑制的細胞,，在匯合前就必須進行傳代,，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化,。

04貼壁細胞如何進行傳代,？

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次,；棄PBS,，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察,，待細胞變圓,，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁,，加4 ml左右*培養(yǎng)液混勻終止消化,，將細胞小心吹打下來，1000 rpm/min室溫離心5min,；棄上清,，細胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3,，1:3-1:6,，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml,，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

05懸浮性細胞應(yīng)如何傳代處理,？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,，稀釋細胞濃度即可,，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中,，1000 rpm/min 室溫離心5 min,。棄上清，細胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸,，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8）,，每T25瓶加*培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng),。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好,，當(dāng)補液時,，需避免反復(fù)吹打。

06貼壁細胞傳代如何使用胰酶,？

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na,。消化液濃度過高時，易造成培養(yǎng)基中細胞碎片增多,，黑渣子增多,，常規(guī)細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化,，對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化,，細胞密度過高超過80%時，采用分步消化法,。胰酶儲存在–20°C,，解凍在4°C進行，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,，保存于–20°C,，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會,。

07如何控制胰酶消化時間,？

胰酶消化的程度是細胞培養(yǎng)中的一個關(guān)鍵步驟：消化過度細胞碎片增多，黑渣子增多,，細胞會成片脫落,，嚴(yán)重影響細胞活性，并有部分細胞漂浮,，隨棄去的胰酶流失,；消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細胞活性,。

不同細胞對消化液的敏感性不同,，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA,，胰酶的儲存時間,，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融,，消化加入的胰酶體積,，消化溫度及細胞的密度有關(guān)。消化對于新購買的細胞,，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間,，可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓，記錄最佳消化時間,，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可,。

人多發(fā)性骨髓瘤細胞 MM.1R

人多發(fā)性骨髓瘤細胞 MM.1S

人急性淋巴母細胞白血病細胞 MOLT-4

人胚肺成纖維細胞 MRC-5（有限細胞系）

人急性淋巴母細胞白血病細胞 MT-4

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞 MUM2B

人前B急性淋巴細胞白血病細胞 NALM-6

人畸胎癌細胞 NCCIT

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299

人肺腺癌細胞 NCI-H1395

人肺癌細胞 NCI-H1437

人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H157

人肺支氣管癌細胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）

人肺癌細胞 NCI-H1703

人肺癌細胞 NCI-H1944

人肺腺癌細胞 NCI-H1975

人肺癌細胞 NCI-H2126

人肺鱗癌細胞 NCI-H226

人肺癌細胞 NCI-H23

人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292

人腎上腺皮質(zhì)細腺癌細胞 NCI-H295R

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358

人小細胞肺癌細胞 NCI-H446

人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 [H460]

人大細胞肺癌細胞 NCI-H661[h661]

人胃癌細胞 NCI-N87

人胃癌細胞熒光素酶標(biāo)記 NCI-N87+LUC

人膽囊癌細胞 NOZ

人腎癌細胞 OS-RC-2

人卵巢腺癌細胞 OVCAR-3

人結(jié)直腸癌細胞 P53R [JHU-56]  

人胰腺癌細胞 Panc 03.27

人胰腺癌上皮細胞 Panc 05.04

人胰腺癌細胞 PANC-1

人胰腺癌細胞吉西他濱耐藥株 PANC-1/GEM

人胰腺癌細胞 PANC10.05

人胰腺癌細胞 PATU8988t（PATU8988）

人胰腺癌細胞 PATU8988S

人前列腺癌 PC-3

人肺癌細胞 pc-9

人胰腺導(dǎo)管腺癌細胞 PL45

人肝癌細胞 PLC/PRF/5

人胚腎細胞 ProPakA.6

人正常肝細胞 QSG-7701

人淋巴瘤細胞 Raji

人B淋巴瘤細胞 RAMOS RA1

人肝膽管癌細胞 RBE

人橫紋肌肉瘤細胞 RD

人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞 REH

人子宮內(nèi)膜癌細胞 RL95-2

人多發(fā)性骨髓瘤細胞 RPMI8226

人結(jié)腸腺癌細胞 RKO

人膀胱移行細胞乳頭瘤 RT4

人前列腺正常細胞 RWPE-1

人前列腺正常細胞 RWPE-2

人小細胞肺癌 SBC-2

人膀胱鱗癌細胞 SCaBER

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

人子宮頸鱗癌細胞 SIHa

人乳腺癌細胞 SK-BR-3

人乳腺癌細胞 SK-BR-3+IUC

人肝腹水腺癌細胞 SK-HEP-1

人低分化肺腺癌細胞 SK-LU-1

人皮膚黑色素瘤細胞 SK-MEL-2

人皮膚黑色素瘤細胞熒光素酶標(biāo)記 SK-MEL-2+LUC

人肺鱗癌細胞 SK-MES-1

人神經(jīng)上皮瘤細胞 SK-N-MC

人腎母細胞瘤細胞 SK-NEP-1

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 SK-N-SH

人卵巢癌細胞 SK-OV-3

人卵巢癌細胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC

人肝癌細胞 smmc-7721

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19

人肝癌細胞 snu-1

人肝癌細胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化細胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤細胞 SW982 [SW-982]

人結(jié)腸腺癌細胞 SW1116

人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞 SW-13

人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞 SW1353

人胰腺癌細胞 SW1990

人結(jié)腸腺癌細胞 SW480

人甲狀腺癌細胞 SW579

人結(jié)直腸腺癌細胞 SW620

人結(jié)直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP

142140210 SW620/5FU

人膀胱移行細胞癌 SW780

人膀胱移行細胞癌細胞 T24

人乳腺導(dǎo)管癌細胞 T47D

人膠質(zhì)母細胞瘤 T98G

人食管癌細胞 TE-1

人食管癌細胞 TE-12

人單核細胞白血病細胞 thp-1

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細胞株 TPC-1

人甲狀腺癌細胞 TT

人喉癌細胞 TU212

人喉癌細胞 TU-138

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U118MG（U-118MG）

人成骨肉瘤細胞 U-2 OS

人類星形膠質(zhì)細胞瘤細胞 U251 MG (KO)

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤細胞 U266

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U87MG

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤細胞 U-937

人膀胱移行細胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌細胞 VCAP

人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞 WERI-RB-1

人黑素瘤細胞 WM-115

人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞 WPMY-1

人正常肝細胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌細胞系+GFP XWLC-05+GFP

人膽囊癌細胞系 ZJU-0430

人膽囊癌細胞系熒光素酶標(biāo)記 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌細胞 ZR-75-1

WRL68人正常肝細胞

巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能,，是研究細胞吞噬,、細胞免疫和分子免疫學(xué)的 重要對象。巨噬細胞容易獲得,，便于培養(yǎng),，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細 胞群,，在條件適宜下可生活 2－3 周,，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存,。

巨噬細胞也建有無限細胞系,，大多來自小鼠，如 P331,、S774A.1,、RAW309Cr.l 等，均獲惡性,，培養(yǎng)中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能,，易于傳代和瓶壁分離，但難 以建株,。

培養(yǎng)巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,， 以小鼠腹腔取材法最為實用， 其法如下：1,、實驗前三天,，向小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml（勿注入腸內(nèi)！,，以 ） 刺流產(chǎn)生大量的巨噬細胞,。

2,、引頸處死小鼠。

3,、手提鼠尾將其全浸入 70%乙醇中 3－5 秒,。

4、置動物于解剖臺,，用針頭固定四肢,，持鑷撕開腹部皮膚，但勿傷及腹膜壁,， 把皮膚拉向上下兩側(cè),，暴露出腹膜壁。

5,、用 70%酒精擦洗腹膜壁,，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同時用手指從 兩側(cè)壓揉腹膜壁,，使液體在腹腔內(nèi)流動,。

6、 用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè)． 使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi),。

7,、小心拔出針頭，把液體注入離心管,。

8,、4℃下 250g 離心 10 分鐘后，去上清,，加 10ml Eagle 培養(yǎng)基,。

9,、計數(shù)細胞,。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30×106 細胞，其中 90%為巨噬細胞,。

10,、以 3×105 個貼附細胞/平方厘米接種。

11,、接種數(shù)小時后,，除去培養(yǎng)液，可去除其它白細胞,，純化培養(yǎng)細胞,，用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中,。

豬腎細胞系 LLC-PK-1 DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

豬腎細胞系 PK-13 DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

豬髖動脈內(nèi)皮細胞 PIEC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長