0500胎牛血清

貨號：0500

規(guī)格：500ml

千舍生物開工大吉,，干細(xì)胞專用,，特級胎牛血清*......

細(xì)胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控,，包括微生物污染的防控和細(xì)胞系間交叉污染的防控,。

實(shí)驗(yàn)中需保持良好的操作習(xí)慣,，所用材料的位置擺放要順手,，污染源和已滅菌物品要分開放置,。實(shí)驗(yàn)室也需定期清潔與消毒,。

※血清與培養(yǎng)基

通常血清的添加比例為10%,，當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例,。在更換血清品牌或者批次時(shí),，最好需對血清的品質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，防止對實(shí)驗(yàn)造成影響,。

對于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟,，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時(shí),，過濾前攪拌時(shí)間不宜過長（培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富,，細(xì)菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產(chǎn)物會對培養(yǎng)基的品質(zhì)產(chǎn)生影響）,。培養(yǎng)基過濾除菌后，應(yīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行無菌驗(yàn)證,，防止污染,。

※細(xì)胞培養(yǎng)瓶

目前商品化的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種,。其中不帶透氣孔細(xì)胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋,，保證CO2能順利進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，對于適應(yīng)能力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞,，可在傳代3-4次后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細(xì)胞系如293T,，HEK293等細(xì)胞，建議每次傳代更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶來保證細(xì)胞狀態(tài),。

※細(xì)胞傳代

正常細(xì)胞形態(tài)較好,，輪廓清晰，邊緣透亮，細(xì)胞增殖狀況良好,。當(dāng)貼壁細(xì)胞長到密度90%時(shí),，需進(jìn)行傳代。

傳代時(shí)通常使用胰酶消化法,。該方法又分為干消化法和濕消化法,。

干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細(xì)胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進(jìn)行細(xì)胞傳代,。

濕消化法：待細(xì)胞變圓,，肉眼觀察下成流沙狀脫落時(shí)即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清,，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代,。

吹打細(xì)胞時(shí),，手法要輕柔,，避免吹打出氣泡，造成細(xì)胞因內(nèi)外壓差破裂,，同時(shí)需避免刮到瓶壁影響細(xì)胞的貼壁,。

不同細(xì)胞的貼壁能力不同，消化時(shí)間不同,；不同細(xì)胞細(xì)胞間連接強(qiáng)度不一樣，消化時(shí)間不同,；同一細(xì)胞生長狀狀況不同，消化時(shí)間不同,。消化時(shí)適時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)，避免因過度消化影響細(xì)胞活性,。

傳代間隔時(shí)間和傳代比例因細(xì)胞而異。細(xì)胞傳代過程中,，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時(shí)及時(shí)棄去細(xì)胞，重新復(fù)蘇,。

※細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

當(dāng)細(xì)胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時(shí),，需及時(shí)大量的凍存,。

細(xì)胞凍存液比例為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1,。細(xì)胞凍存密度通常為1-3×106個(gè)/ml。細(xì)胞凍存采用慢凍方式,，減少冰晶形成，避免細(xì)胞損傷,。通常4℃放置0.5 h,，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。

細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)升溫要快,，防止在解凍過程中水分進(jìn)入細(xì)胞,，形成冰晶，影響細(xì)胞存活,。38℃水浴不時(shí)搖動,，在1分鐘內(nèi)使其*融化,，1000rpm離心5min,棄去上清,，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中,。

※用真誠感動細(xì)胞

俗話說，心誠則靈,。對待細(xì)胞培養(yǎng)也應(yīng)如此,，“自己要用的細(xì)胞自己養(yǎng)"，多去觀察細(xì)胞生長狀態(tài),。

所謂“知彼知己,，百戰(zhàn)不殆"。培養(yǎng)細(xì)胞需要我們的耐心以及不斷的摸索和積累,，了解了每種細(xì)胞各自的習(xí)性后,，再“傲嬌"的細(xì)胞也能在我們的“真誠"下認(rèn)真“成長"※※※※

因此選擇正確的，靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

→→→→蘇州千舍生物,，進(jìn)口胎牛血清,，搬運(yùn)工←←←←←←

相關(guān)血清：ScienCell胎牛血清  0500   500ml

小鼠乳腺癌細(xì)胞+LUC 4T1+luc 細(xì)胞系

大鼠脂肪干細(xì)胞+RFP 原代細(xì)胞+RFP 原代細(xì)胞

山羊乳腺上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP  原代細(xì)胞永生化

 人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP 細(xì)胞系

 人肺癌細(xì)胞+Luc A549+Luc 細(xì)胞系

人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT15/Fu 貼壁生長

人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株 HCT-15/Taxol 貼壁生長

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ 貼壁生長

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞+LUC U251 MG/TMZ+LUC(3000) 貼壁生長

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞+GFP 原代細(xì)胞+GFP 原代細(xì)胞

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+RFP HUVEC+RFP 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP HUVEC+GFP 貼壁生長

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUV-EC-C 細(xì)胞系

人前庭鞘膜瘤細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人乳腺癌細(xì)胞+LUC MCF-7+Luc 貼壁生長

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型 貼壁生長

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型 貼壁生長

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人胰腺癌細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

小鼠肝癌細(xì)胞+LUC HEPA1-6+LUC 貼壁生長

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞+LUC K7M2WT(K7M2-WT)+LUC 貼壁生長

小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

小鼠脂肪干細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

鴨胚成纖維細(xì)胞永生化 Duck embryo 原代細(xì)胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮） 懸浮生長

豬脂肪干細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

豬肝星狀細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

兔肝臟間質(zhì)細(xì)胞永生化  原代細(xì)胞永生化

貼壁細(xì)胞傳代：

1）移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)液,。（不要直接倒掉,，避免瓶口殘留導(dǎo)致易污染）

2）使用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液（PBS）沖洗細(xì)胞,。從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動細(xì)胞層,，前后搖晃容器數(shù)次,，最后移棄沖洗液。（洗去殘留的血清,，避免影響胰酶的活性,。）

3）以 25 cm2的培養(yǎng)瓶為例，向瓶內(nèi)加入1ml胰蛋白酶-EDTA（請根據(jù)各細(xì)胞的指引使用合適的濃度）消化液,，輕輕搖動培養(yǎng)瓶,，使消化液流遍所有細(xì)胞表面，放到37 ℃ 孵育,。通常,，幾分鐘內(nèi)，會發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,、細(xì)胞間隙增大,，傾斜培養(yǎng)瓶時(shí)細(xì)胞層能自然流下，此時(shí)應(yīng)加入2-3ml含血清的*培養(yǎng)液終止消化（細(xì)胞解離所需時(shí)間請參考各細(xì)胞的指引,，并建議每隔30秒在顯微鏡下觀察細(xì)胞的解離情況）,。另外，并不是所有貼壁細(xì)胞都適用采用胰蛋白酶進(jìn)行解離,，請根據(jù)各細(xì)胞的指引選擇合適的解離方法,。

4）使培養(yǎng)瓶傾斜，吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)液體輕輕沖向原細(xì)胞生長表面,，重復(fù)該動作2-3次,，使所有細(xì)胞沿瓶底流下，再輕柔地把細(xì)胞吹打成單個(gè)懸液（吹打過程中應(yīng)避免氣泡的產(chǎn)生）,。

PS：對于難消化的細(xì)胞,，盡量不要通過用力吹打的方式來處理，以免對細(xì)胞產(chǎn)生物理損傷,?？梢韵葘⒁呀?jīng)消化的細(xì)胞分出來，及時(shí)終止消化,。然后再對仍然貼壁的細(xì)胞進(jìn)行再次消化,。做到分層消化，避免易消化細(xì)胞長時(shí)間在胰酶消化下受損,。

5）把所有的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,，800-1000rpm離心3-5分鐘后移棄上清。

6）加入新的含血清*培養(yǎng)液重懸成單細(xì)胞懸液,。按各細(xì)胞指引推薦的傳代比例,，把細(xì)胞懸液均勻分到各培養(yǎng)器皿中,，補(bǔ)足新的含血清*培養(yǎng)液，輕輕搖晃混勻,。

7）放到37 ℃ 孵育,，第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞的貼壁情況。

0500胎牛血清,，蘇州千舍現(xiàn)貨,，F8687說明書|F8687胎牛血清價(jià)格，詳情見我司技術(shù)文章~~~~~~