人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞 

 產(chǎn)品編號(hào)：

產(chǎn)品規(guī)格：>5×10⁵細(xì)胞數(shù)

產(chǎn)品價(jià)格：9650

包裝規(guī)格：1ml凍存細(xì)胞懸液或T-25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞詳述：

神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),，是除了神經(jīng)元以外的所有細(xì)胞，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量大約是神經(jīng)元的十倍,。具有支持,、滋養(yǎng)神經(jīng)元的作用。

膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元一樣也具有細(xì)胞凸起,，但其胞質(zhì)凸起不分樹(shù)突和軸突,。

星形膠質(zhì)細(xì)胞，是膠質(zhì)細(xì)胞中體積大的一種,。從胞體發(fā)出許多長(zhǎng)而分支的突起,，伸展充填在神經(jīng)細(xì)胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細(xì)胞的作用,。

細(xì)胞特性:

1)  組織來(lái)源于人的正常腦組織,。

2)  細(xì)胞鑒定：神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。

3)  經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

4)  不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌,。

5)  細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭形細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系作為體外培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。

人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞常見(jiàn)問(wèn)題：

1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好,？還是冷凍好？

要冷藏,！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),，其溶液的PH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿,，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月~一年。

2. 體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,，及使用方法,。

幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),，在缺少谷氨酰胺時(shí),，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以,，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20?C冰凍保存,，用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4?C冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺,。

3. 培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

由于,，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響,。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同,，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng),。

但總體來(lái)說(shuō),，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng),。因此,，我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些,。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí),，溶液的PH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。

4. 常用培養(yǎng)基及培養(yǎng)用液的滲透壓范圍

培養(yǎng)基名稱(chēng)滲透壓范圍（mOSM）

DMEM（高糖）315~350

DMEM（低糖）270~330

RPMI-1640260~290

MEM-EBSS280~310

MEM-NEAA280~310

McCoy5a280~310

MEM-a280~310

M—199275~305

IMDM270~300

DMEM/F-12280~310

F—10270~300

F—12275~300

培養(yǎng)基名稱(chēng)滲透壓范圍（mOSM）

L—15280~320

D-Hanks280~300

Hanks280~300

PBS275~300

5. 細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎,？

不見(jiàn)得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱膒H,、溫度,、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++,Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下,，pH8.0,溫度37oC其作用能力z強(qiáng),。另外，鈣,、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力,。我們每次進(jìn)行傳代消化前,，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈,，這樣就能大大提高消化液的消化能力,。通常使用的消化液濃度為：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ,。

（3）0.25%胰蛋白酶

溶液ｐＨ８.０～９.０,；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液,。

6. 培養(yǎng)基在使用過(guò)程中應(yīng)注意的問(wèn)題：

（1）培養(yǎng)基在使用前需37oC預(yù)熱或在室溫平衡后再使用,。

（2）細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，吸取過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,，防止殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)基焦化,，將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液中。

（3）盡量縮短各種液體,、細(xì)胞的暴露時(shí)間,。

（4）避免液體間、細(xì)胞間的交叉污染,。

（5）配制*培養(yǎng)基時(shí),，配制的量在2周內(nèi)用完為好。

7. 血清的有關(guān)問(wèn)題：

新生牛血清：新出生牛5天內(nèi)取血制成

小牛血清：小牛出生16周以?xún)?nèi)采血制成,。

胎牛血清：（進(jìn)口血清）要求剖腹取胎制成,。

國(guó)內(nèi)廠家往往不能做到，經(jīng)常把出生2天以?xún)?nèi)采血稱(chēng)為胎牛血清,。

根據(jù)血清的生產(chǎn)工藝及血紅蛋白,、內(nèi)毒素含量又分為：

（1）.特級(jí)胎牛血清：40納米過(guò)濾，內(nèi)毒素含量≤10EU,，血紅蛋白含量≤10mg/dl,。

（2）.優(yōu)等胎牛血清：經(jīng)過(guò)3次100納米過(guò)濾，內(nèi)毒素含量≤25EU/ml,，血紅蛋白含量≤25mg/ml,。

（3）.標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清：3次100納米過(guò)濾，低內(nèi)毒素,，低血紅蛋白含量,。

（4）.活性碳/葡聚糖處理血清：激素含量大大降低。

（5）.透析型胎牛血清：次黃嘌呤和胸腺核苷含量大大降低,。

8. 其他細(xì)胞培養(yǎng)用液：除培養(yǎng)基,、血清、谷氨酰胺外,，其他幾種液體也屬必須,，不可省略,。

（1）雙抗：200倍，（1ml/支）其終濃度為青霉素100U/ml,；鏈霉素100ug/ml,，-24oC保存。

（2）L-谷氨酰胺：100倍,，（1ml/支）,，終濃度2mM，-24oC保存,。

（3）丙酮酸鈉：配制濃度50mM,，4ml/支，終濃度為1mM/ml,，-24oC保存,。

（4）Hepes液：配制濃度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml

*培養(yǎng)基中,，終濃度為25mM/ml,，常溫保存。

9. 支原體污染及檢測(cè)：

（1）支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)中z常見(jiàn),、不易被查覺(jué),，但支原體污染可顯著影響細(xì)胞功能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的目前所知能獨(dú)立生活的z小微生物,，它無(wú)細(xì)胞壁,，形態(tài)呈高度多形性，z小直徑0.2um,，可通過(guò)濾器,。

目前通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)100余株/系細(xì)胞的檢測(cè)，形勢(shì)不容樂(lè)觀,。污染率達(dá)30%~60%,。課題組從國(guó)外引進(jìn)細(xì)胞株/系也經(jīng)常出現(xiàn)支原體的污染。支原體在污染細(xì)胞后,，它通過(guò)影響細(xì)胞的DNA,、RNA的合成及急速消耗培養(yǎng)基中的氨基酸來(lái)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，并能降低細(xì)胞的融合率,。因此,，在運(yùn)用各種細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，首先要證明所用細(xì)胞有無(wú)支原體的污染,。

（2）支原體污染后，培養(yǎng)基可不發(fā)生渾濁,，細(xì)胞病變輕微或不明顯,，因此難以發(fā)現(xiàn),。目前，支原體檢測(cè)的方法有以下幾種,。

（a）相差顯微鏡觀察,；

（b）低張?zhí)幚淼匾录t染色法；

（c）熒光染色法,；

（d）酶標(biāo)法,；

（e）PCR法：使用該方法進(jìn)行檢測(cè)。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高,，檢測(cè)耗時(shí)短,，樣品量小

（只需50ul細(xì)胞培養(yǎng)用液上清）。

缺點(diǎn)：引物及制劑費(fèi)用較高,。