牛一氧化氮NO ELISA試劑盒蘇州千舍生物為您傾情供應(yīng),，成熟技術(shù)，嚴(yán)格工藝流程,，*抗體/抗原,，嚴(yán)格QC檢測(cè)后方可出庫(kù)，請(qǐng)放心購(gòu)買,！

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒

 一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />     酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay 簡(jiǎn)稱ELISA）是在免疫酶技術(shù)（immunoenzymatic techniques）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù),ELISA過程包括抗原（抗體）吸附在固相載體上稱為包被,，加待測(cè)抗體（抗原）, 再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體（抗原）,生成抗原（抗體）--待測(cè)抗體（抗原）--酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物,。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體（抗原）的量,。待測(cè)抗體（抗原）的定量與有色產(chǎn)生成正比。

操作注意事項(xiàng)
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。 
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9）按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒的準(zhǔn)備
1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,，不能儲(chǔ)存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒操作步驟
1）使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

牛一氧化氮NO ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。