產(chǎn)品名稱(chēng):人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞HCT8
貨號(hào):QS-H115
細(xì)胞規(guī)格:1-3×10^6細(xì)胞量
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
培養(yǎng)液:RPMI-1640+10% FBS
凍存條件:80%*培養(yǎng)液+10%FBS+10%DMSO
運(yùn)輸方式:常溫順豐運(yùn)輸和干冰順豐運(yùn)輸
貨 期:復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周,,凍存細(xì)胞的需要3-5天(特殊情況會(huì)有說(shuō)明)
質(zhì) 控:無(wú)支原體、無(wú)污染,、符合標(biāo)準(zhǔn)
研究范圍:僅供科研使用
我司是一家專(zhuān)注于生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè),,在廣大用戶(hù)的幫助和支持下,經(jīng)過(guò)不懈的努力,,已成為國(guó)內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一,,一站式采購(gòu)商城,,代理亞洲、歐美國(guó)家300多種品牌,,200萬(wàn)種以上產(chǎn)品,。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國(guó),在同行獲得*,。
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞HCT8
我司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品是國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑,。GIBCO、HyClone,、NTC,、SIGMA、 BI ,、GEMINI,、PAN和SBI無(wú)外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基,、胰酶,、雙抗、無(wú)血清凍存液,、日本三菱產(chǎn)品,、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善,,我們以飽滿(mǎn)的熱情歡迎新老客戶(hù)選購(gòu),!
我司以客戶(hù)為核心,以產(chǎn)品質(zhì)量求生存,,以售后服務(wù)求信譽(yù),。我們通過(guò)不斷改進(jìn)來(lái)提高效率,絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià),。“誠(chéng)信,、創(chuàng)新、嚴(yán)謹(jǐn),、專(zhuān)業(yè)”愿以飽滿(mǎn)的熱情期待各界朋友攜手合作,,共創(chuàng)輝煌!
細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),,由于不同細(xì)胞來(lái)源不同的組織器官環(huán)境,,其體外培養(yǎng)所需的養(yǎng)分不盡相同,選擇合適的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)至關(guān)重要,。
按培養(yǎng)基的來(lái)源可分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基(目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基),。按其物質(zhì)狀態(tài)可分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi),干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌(可靈活配制配比),,液體培養(yǎng)基由專(zhuān)業(yè)商家提供(用戶(hù)可直接使用,,非常方便),。
合成培養(yǎng)基成分
主要成分有:氨基酸、碳水化合物,、無(wú)機(jī)鹽,、維生素及其它輔助物質(zhì)。
氨基酸:是組成蛋白質(zhì)的基本單位,。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異,,但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,,這幾種氨基酸稱(chēng)為必需氨基酸,。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時(shí),,細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡,。因此,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺,。但是,,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,,應(yīng)置于-20℃冰箱中保存,,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2 周以上時(shí),,還應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺,。
維生素:在細(xì)胞培養(yǎng)中,盡管血清是維生素重要來(lái)源,,但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長(zhǎng),。
碳水化合物:是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來(lái)源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分,。主要有葡萄糖,、核糖、脫氧核糖,、丙酮酸鈉和醋酸等,。
無(wú)機(jī)鹽:培養(yǎng)液中無(wú)機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外,,通過(guò)提供鈉,,鉀和鈣離子,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能,。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素,細(xì)胞通??赡褪?60mOsm/kg~320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng),。特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,,特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì),。向培養(yǎng)液中添加HEPES 時(shí)需按以下“緩沖系統(tǒng)”方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。
緩沖系統(tǒng):大多數(shù)細(xì)胞所需pH 在7.2 - 7.4,。但是,,細(xì)胞培養(yǎng)zui適pH 值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類(lèi)不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH (7.4 - 7.7), 而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH (7.0 - 7.4),。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2 體系進(jìn)行緩沖,,因此,氣相中的CO2 濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡,。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2 濃度設(shè)定在5%,,培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L;如果CO2 濃度維持在10%,,培養(yǎng)液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L,。同時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊,,以保證氣體交換,。HEPES 是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,,但是非常昂貴,,在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,,以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加,。在這種培養(yǎng)條件下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中,。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,,堿性培養(yǎng)液呈深紅色,。
其它成分:
在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分,如:
(1)非必需氨基酸:有些細(xì)胞需要額外添加,。
(2)丙酮酸鈉:是糖酵解的中間產(chǎn)物,,可直接進(jìn)出細(xì)胞,作為替代碳源添加,。
(3)胰島素:可以促進(jìn)細(xì)胞增殖,。
(4)qing化可的松:可促進(jìn)表皮細(xì)胞生長(zhǎng)。
(5)IL-2:促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng),,NK92依賴(lài)等,。
(6)地塞米松:激素類(lèi),促進(jìn)部分細(xì)胞生長(zhǎng),。
(7)腎上腺素:促進(jìn)部分細(xì)胞生長(zhǎng),。
(8)轉(zhuǎn)鐵蛋白:為細(xì)胞內(nèi)化和細(xì)胞代謝提供所需的鐵,。
(9)2-qiu基乙chun(2-Mercaptoethanol,2-Me):2-Me的活性部分是硫氫基,,其中一個(gè)重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽,,能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖,為非特異性的激活作用,。另一個(gè)重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA 合成,,增加植物凝集素(PHA)對(duì)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用。
液體培養(yǎng)基保存
液體培養(yǎng)基應(yīng)于4℃冰箱避光保存,,實(shí)驗(yàn)前放入37℃預(yù)熱,。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12個(gè)月。液體培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而慢慢分解,。如果細(xì)胞生長(zhǎng)不良,,可以再添加適量L-谷氨酰胺。
干粉培養(yǎng)基保存
4℃冰箱避光保存,,有效期36個(gè)月,。
血清
細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清,、人血清等,,其中牛血清是zui常用的血清,分為胎牛,、新生牛和小牛血清,。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,,價(jià)格昂貴,。新生牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來(lái)的血清,如廠家能做到這一點(diǎn),,新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大,。小牛血清,如小牛出生后已哺乳,,從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì),,其質(zhì)量明顯不如前兩種。
血清的質(zhì)量,,種類(lèi)及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長(zhǎng),,而不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同,尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng),,某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì),。因此,在購(gòu)買(mǎi)大量血清之前,,必須對(duì)血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)能力進(jìn)行檢測(cè),,然后再大量購(gòu)買(mǎi)質(zhì)量好的同一批號(hào)的血清,,并注意以下幾點(diǎn):
(1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃–-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月,。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,,因此,血清在凍入低溫冰箱前,,必須預(yù)留一定體積空間,,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/span>
(2)一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌,。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清,。
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天,。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生,。切勿直接將血清從-20℃ 進(jìn)入37℃解凍,,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,。
(4)熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清,。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活,。除非必須,,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量,。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
(5)切勿將血清在37℃放置太久,,否則血清會(huì)變得渾濁,,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)量。
(6)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,。可用離心3000rpm, 5 分鐘去除,,也可不用處理,。
(7)顯微鏡下“小黑點(diǎn)”:經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)”,,常誤認(rèn)為血清受污染,。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),,但如果懷疑血清質(zhì)量,,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清,。