什么是胎牛血清,？

    采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血,。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,，血中含有豐富的生長發(fā)育因子,，非常適合各種細胞的培養(yǎng),。一旦胚胎發(fā)育wan全，這些因子自動消失,。因此,，8個月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月,，不能作為胎牛血清的原料來使用,。

WinSera胎牛血清的使用要點

1.初次開封胎牛血清如何化凍？

胎牛血清常規(guī)儲存溫度為-20℃，如果更加長期保存可以-80℃保存,。解凍的時候不建議直接放在常溫中（25-37℃）解凍,，很容易產生絮狀沉淀，進而有可能影響血清品質,。建議的方式為先由-20/-80℃轉移到4℃解凍,，全部為液體后，再由4℃轉移到室溫,。在解凍的過程中,，需要隨時晃動，使血清內成分和溫度混合均勻,，有助于減少沉淀的產生,。解凍后，就可以把血清用15 mL或者50 mL無菌離心管分裝凍存啦,，可以根據(jù)自己使用血清的頻率在4℃存放一管已化凍分裝的血清,，方便經常配制培養(yǎng)基，在4℃也不可以存放太久,，最好在一個月內用完,。解凍后的胎牛血清不可以在37℃或者室溫存放太久，避免血清中重要的細胞生長因子失活而影響細胞狀態(tài),。

2.血清的用量
原則上血清添加量不宜太多,，通常添加5%、10%,、20%,。大部分細胞正常培養(yǎng)使用10%的血清濃度，部分細胞原代提取時使用20%血清,。具體某一株細胞適應的血清濃度,，需要根據(jù)細胞特性、實驗目的摸索,。

3.胎牛血清什么時候需要熱滅活,？
這就涉及到什么是熱滅活。熱滅活一般是以56℃,，30 min來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟,，可以使補體去活化,，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮,，肥大細胞和血小板組胺的釋放,，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活,。除了這些特殊實驗要求,，常規(guī)細胞培養(yǎng)需要熱滅活嗎？通常來說,，熱滅活對大多數(shù)細胞培養(yǎng)都不是必須進行的步驟,，經此處理過的血清對細胞的生長作用很小，甚至可能會因為高溫處理影響了血清的質量,，而造成細胞生長速率的降低,，沉淀物增多等不好的影響。

4.更換血清的正確步驟,。
養(yǎng)細胞的小伙伴經常會遇到同一個細胞需要更換血清的情況,。如果將另一款血清配制的培養(yǎng)基直接用于細胞培養(yǎng)，可能會發(fā)現(xiàn)以前增殖很快的細胞突然變慢甚至逐漸脫壁死亡了,。這種情況下,，多數(shù)為細胞被以往的培養(yǎng)環(huán)境馴化，突然更換一個新的營養(yǎng)環(huán)境,，哪怕是品質更好的血清,，也可能會出現(xiàn)不適應的情況。通常來說,，更換血清的時候我們會遵循梯度更換保證細胞可以適應,。血清開始使用時，如果是重新復蘇細胞,，建議用原培養(yǎng)體系進行細胞復蘇,，待細胞狀態(tài)恢復后再進行測試。測試時不建議直接100%換成新血清體系進行培養(yǎng),，應按照比例梯度替換,。例如，換液按照新舊體系1:3,，第二次換液1:1,，第三次換液3:1，而后全替換,。針對一些對培養(yǎng)體系較為敏感的細胞,，需進一步細化替換比例。

5.血清解凍以后出現(xiàn)了懸浮物是什么,？還能繼續(xù)用嗎,？

解凍以后如果發(fā)現(xiàn)有少量乳白色的絮狀或者點狀物質，這種主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,，這些絮狀物不會影響血清本身的質量,，可用400×g離心5 min取上清,。不會對細胞有太大的影響。

解凍后出現(xiàn)的絮狀沉淀

6.血清在使用前是否需要對血清進行過濾,？
一般廠商提供的血清為無菌,，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,，切勿直接過濾血清。

7.使用血清培養(yǎng)細胞以后,，鏡下觀察到會動的“小黑點”會是污染嗎,？

如果您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先,，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，黑點是否做不規(guī)則游動。如果細胞被污染,，微生物則會大量繁殖,，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁,。污染包括細菌污染,、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞,，生長狀態(tài)良好,，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化,，那么,，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過程中自然破碎后的細胞殘骸,；

(2)血清中的雜蛋白,，可能是反復凍融的結果；

(3)配制培養(yǎng)基的水質,、容器不合格,。可應用離心,、過濾的方法去除這些黑點,；

(4)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質,，多次傳代可以消除,。

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