細胞名稱:DC2.4 小鼠樹突狀細胞培養(yǎng)說明書

貨號：WS20099（種屬鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

DC2.4是通過用表達鼠粒細胞-巨噬細胞CSF (GM-CSF)和myc和raf癌基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)C57BL/6小鼠的骨髓分離物而產(chǎn)生的永生化鼠樹突細胞,。DC2.4表現(xiàn)出樹突細胞的特征,，包括細胞形態(tài)和樹突細胞特異性標(biāo)記的表達,，以及吞噬和呈遞MHC類和II類分子上的外源性抗原的能力,。樹突細胞(DC)是免疫系統(tǒng)的抗原呈遞細胞,，在大多數(shù)組織中發(fā)現(xiàn),，特別是那些與外部環(huán)境接觸的組織(例如，皮膚和鼻,、肺,、胃和腸的內(nèi)層),。最早于1973年描述,，樹突狀細胞的主要功能之一是吞噬外來病原體,，并將加工后的抗原呈遞至幼稚T細胞，以調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng),。樹突狀細胞還表達Toll樣受體,，并幫助調(diào)節(jié)先天免疫反應(yīng)。盡管它們分布在大多數(shù)組織中,，但DC在體內(nèi)數(shù)量很少,，并且在體外難以維持。這些困難限制了樹突細胞的研究,。

一,、細胞特性

1） 來源: C57BL/6小鼠 骨髓

2） 形態(tài)：上皮樣  貼壁和貼壁不牢（半貼壁半懸浮)混合生長

3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

二,、運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

三,、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1）準(zhǔn)備RPMI 1640（推薦WS-P-0001）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；添加10ng/mL murine GM-CSF,；雙抗，1%,。

  血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)?。。,?！

1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

四,、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況,。

（一)如果細胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，打開細胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。

(二)如果細胞已長滿,，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁,，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上wan全培養(yǎng)基中止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加wan全培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明,，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1,、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，否則不能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下,。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3、有些細胞貼壁不牢,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4,、收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系,。