編號：WS-HCT002                    

細胞株名稱：HCT116/L人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細胞株

種屬：人

組織來源：結(jié)腸癌

生長特性：貼壁生長

形態(tài)特征：上皮細胞

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄,。

培養(yǎng)條件：

wan全培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+2000ng/ml  L

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03,。

培養(yǎng)條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細胞后,，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液,，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿,，即可進行傳代培養(yǎng),。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上wan全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加wan全培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半,，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二,。

注：1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，否則不能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下,。

2,、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3,、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi),。

4、收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系,。..

凍存方法：

  凍存液：90%胎牛血清,，10%DMSO

  儲存：液氮儲存