無外泌體血清不包含各種由蛋白質(zhì)編碼和調(diào)節(jié)的RNA,包括mRNA,、miRNA,、rRNA和snoRNA。它們中的大部分(>70%)仍然存在于通過長時間超速離心獲得的無囊泡FBS中,,這些FBS常用于研究細胞外囊泡(EV)和細胞間通訊,。FBS相關(guān)的RNA將與細胞外囊泡RNA(exrna)一起被分離,這將干擾下游的RNA分析,。因此,,在實驗設(shè)計過程中,有必要采取預(yù)防措施,,減少FBS源RNA的干擾,。
1、內(nèi)毒素含量低,經(jīng)過三次納米過濾,。
2,、嚴格控制批次差異。
3,、可靠和可追溯的來源,。
4、每個批次都應(yīng)提供相應(yīng)的檢驗檢疫報告,。
5,、適用于各種特殊的細胞培養(yǎng)。
6,、對于干冰運輸,,建議儲存溫度為-20℃至-10℃。
無外泌體血清是指直徑為30-100納米的盤狀囊泡,,其中含有多種蛋白質(zhì),、mRNA、非編碼RNA和其他分子,。外泌體主要來自細胞內(nèi)的多囊體,,多囊體的外膜與細胞膜融合后釋放到細胞外基質(zhì)中。目前,,大量文獻報道,,幾乎所有類型的細胞都能產(chǎn)生和釋放外泌體。在不同的生物液體(血液,、尿液,、腦脊液、唾液,、牛奶,、腹水)中發(fā)現(xiàn)大量的外泌體,。不含外泌體的血清被細胞分泌和釋放后,,通過個別體液在體內(nèi)擴散。被靶細胞攝取后,,釋放內(nèi)部生物分子,,參與細胞間交流,調(diào)節(jié)細胞功能,。血清的滅活處理步驟如下,。
1、選用與血清瓶規(guī)格相同的對照瓶,。
2,、在對照瓶中放入與血清體積相等的水。
3,、溫度預(yù)檢,。在對照瓶中插入2-3支選定的溫度計(以保證試驗溫度的準(zhǔn)確性),,放入水浴箱中,接通電源,,調(diào)節(jié)溫控旋鈕,,保持水浴箱中指示的溫度為56℃。
4,、將無外泌體血清滅活血瓶和帶溫度計的對照瓶放入水浴箱,,待溫度計指示的溫度升至56℃時,等待30分鐘,。
5,、大瓶游離外分泌血清滅活后,重新進行包裝,。
6,、儲存:分包裝后,取無外分泌體血清樣品進行無菌試驗,,在-20~-70℃下儲存,。