外泌體是指含有復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜囊泡(30-150nm)。如今,,它們特指直徑為40-100nm的盤狀囊泡。作為細(xì)胞間通訊的重要媒介,,它作為信使,,為細(xì)胞和細(xì)胞外環(huán)境傳遞信息,保證機體的正常工作,。對于大多數(shù)細(xì)胞而言,,用于體外培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基必須在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加胎牛血清(FBS)作為生長添加劑,。然而,常用的FBS通常來自牛血清,,其中含有大量的牛外泌體和外源性細(xì)胞外囊泡,。這些外泌體含有牛相關(guān)蛋白或miRNA和其他分子。在研究相關(guān)細(xì)胞自身分泌的外泌體時,,牛血清中的外泌體可能會造成嚴(yán)重的背景問題,,從而影響或干擾結(jié)果的判斷。在細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng),、細(xì)胞分泌的外泌體等相關(guān)研究中,,血清中所含的外泌體會對研究結(jié)果產(chǎn)生巨大的干擾作用。
無外泌體血清*可以滿足外泌體研究中對細(xì)胞培養(yǎng)條件的要求,。以優(yōu)質(zhì)胎牛血清為源血清,,經(jīng)特定方法處理后,血清中外泌體去除率達(dá)到97%以上,。通過細(xì)胞生長實驗,,含有外泌體freefbs的培養(yǎng)基支持大多數(shù)細(xì)胞的生長。與含有正常血清(FBS)的培養(yǎng)基相比,,對細(xì)胞生長和存活有相同甚至更好的促進作用,。

制備無外泌體血清常用的方法是超速離心。主要有三種方法:將血清與培養(yǎng)基按1:4比例稀釋,,然后超速離心10000g過夜收集上清液,;血清10000g直接離心過夜;以180000g離心3-6小時,。隔夜離心時間視情況而定,,一般在10-14小時之間。
需要注意的是,,離心后,外泌體會在試管底部富集,。吸上層血清時不要接觸底部沉淀物,。上層血清約80%被吸收,剩余的混濁血清留作其他非外泌體細(xì)胞的培養(yǎng),。對于超速離心后的血清,,可以檢測粒徑(離心前后的樣品)。如果純度不夠,,則將離心后收集的血清進行第二次超速離心,。
無外泌體血清使用注意事項:
1、產(chǎn)品冷凍后,,高豐度蛋白會形成晶體,,NTA檢測時會出現(xiàn)異峰,屬正常現(xiàn)象,。
2,、本產(chǎn)品已滅菌,可直接用于細(xì)胞培養(yǎng),。使用前請將產(chǎn)品置于2-8℃自然解凍,,或分裝后于-20℃保存,但不要反復(fù)凍融,。
3,、請勿使用本產(chǎn)品進行高溫?zé)釡缁睢?/div>