細胞一般儲存在液氮中,，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的,。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。

　　細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態(tài),，今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟,。

　　一、檢查

　　收到細胞株包裹時,，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,，若有請立即處理告訴寄方。細胞株請盡速開始培養(yǎng),，或立即冷凍保存(置于–70 °C,，隔夜后,，移到液氮罐保存)。

　　二,、冷凍細胞解凍　

     方法一：

1,、準備好37度水浴鍋，預熱至37度,；

2,、準備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml*培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）,；

3,、取出凍存細胞管，用一次性PE手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進水導致污染）,，迅速放于水浴鍋內(nèi),，于1min內(nèi)融化*；

4,、取出凍存管,，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內(nèi),；

5,、吸取凍存管內(nèi)細胞懸液，加入步驟2中準備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi),，8字緩慢搖勻,；

6、培養(yǎng)瓶放于37度CO₂恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),，靜置培養(yǎng)24h,，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細胞、懸浮細胞不同操作方法）,。

     方法二：

1,、準備好37度水浴鍋，預熱至37度,；

2,、準備好15ml無菌離心管，加入10ml*培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）,；

3,、準備好實驗用培養(yǎng)板或培養(yǎng)器皿；

4,、取出凍存細胞管,，用PE手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進水導致污染），迅速放于水浴鍋內(nèi),，于1min內(nèi)融化*,；

5,、取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干,，置于超凈臺內(nèi),；

6、吸取凍存管內(nèi)細胞懸液,，加入步驟2中準備好的15ml無菌離心管,，輕輕吹打混勻；

7,、將離心管內(nèi)細胞懸液，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)（注意接種密度不低于2×10⁴/cm²）,，放于37度CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細胞,、懸浮細胞不同操作方法）,。　　

　　三,、細胞復蘇注意事項

1,、整個復蘇過程要盡量快，溶解時間太長可能影響復蘇效果,；

2,、已溶解的凍存細胞盡量短時間的在常溫存放，盡快稀釋或者離心去除DMSO,；

　　3,、由于“化冰"這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里拿出來的凍存管,，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感,，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖,；

　　4,、取凍存管時要謹防凍傷，尤其是夏天,，盡管熱也最好穿長袖白大褂,；

　　5、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行,，也就是直接把凍存管離心,，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加*培養(yǎng)基重懸細胞,，接著把細胞轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng),。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈,，但是基本影響不大；

6,、 復蘇第二天記得去看看細胞,，如果狀態(tài)還不錯的話就說明復蘇成功。

WINSERA®特級胎牛血清適合培養(yǎng)哪些細胞,？

1,、特級胎牛血清具有非常越的促細胞生長能力，適合培養(yǎng)腫瘤細胞,，原代細胞,，部分干細胞和嬌貴細胞。

2,、血清如何保存, 可以放多久,？

3、貯藏溫度≤-15℃,，可長時間保存,； 4℃存放時，請勿超過一個月,。

4,、血清溶解以后，出現(xiàn)沉淀怎么辦?

5,、若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400-600g離心5min,，上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng),。 我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物， 一方面它可能會阻塞您的過濾膜,；另一方面,，過濾血清這種行為可能會導致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。