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那么,,透析胎牛血清具體適用于實驗中有哪些常見場景,?我們來詳細講講。
一,、實驗過程中需要標記氨基酸
使用放射性標記小分子,,對生物合成過程進行監(jiān)測,以研究蛋白質(zhì)等大分子的生化性質(zhì)、合成,、加工,、細胞內(nèi)傳送、分泌和降解過程,。這時,,常將細胞放在含有充足養(yǎng)分和放射性標記氨基酸(如35S標記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養(yǎng)液中進行標記。
為避免外源未標記的氨基酸的干擾,,這時所用的血清就是透析胎牛血清,,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎(chǔ)培養(yǎng)基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸,。
這種方法常見于生化代謝調(diào)控與疾病的機理研究,。其他常見標記物包括14C標記的絲氨酸、亮氨酸,、纈氨酸或32P標記的焦磷酸,,這時培養(yǎng)液中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清都要求不含有這種小分子。
二,、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株的篩選
另一種需要用到透析胎牛血清的情況是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株的篩選,。
最常見的基因工程用細胞株是二氫葉酸還原酶缺陷型(DHFR-)的CHO細胞。CHO(DHFR-)細胞由于不含DHFR,,因而只能在含有胸苷,、甘氨酸和次嘌呤的培養(yǎng)基中才能生長。若將DHFR基因?qū)脒@種缺陷型細胞,,則細胞能在不含這三種分子的培養(yǎng)液中生長,。同時,加入氨甲喋呤(MTX)可刺激DHFR基因大量表達,,與之一同轉(zhuǎn)染的外源基因就能大量表達,,因而可以獲得人們所需的基因工程藥物。類似的情況也見于雜交瘤細胞的篩選,。
這時的胎牛血清由于不含有次嘌呤和胸腺嘧啶等,,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽性轉(zhuǎn)染細胞克隆的篩選,。
基因調(diào)控的研究
采用報告基因檢測系統(tǒng)(常見熒光素酶作為報告基因)進行基因調(diào)控的研究時,,為避免特定外源小分子(如激素等)作為基因激動劑的干擾,即需要透析胎牛血清來培養(yǎng)基因轉(zhuǎn)染后的細胞,。
每個批次提供完整的檢測報告,。
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