關(guān)于胎牛血清熱滅活的問題

成為常規(guī)操作的血清熱滅活

至少70%的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘Ｒ?guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘,。隨著血清采集,、處理、加工工藝的提高,，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

熱敏補(bǔ)體與熱滅活

熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),，但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要,。Triglia和Linscott曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%,，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中,，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象,。

另外，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,，也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用,。

支原體與熱滅活

在對(duì)補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用,。多年以前,，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí)，血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生,。針對(duì)這個(gè)問題,，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù)，自從采用這項(xiàng)技術(shù)以及后來(lái)的40納米濾過技術(shù)之后,，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染,，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因。

胚胎發(fā)育與熱滅活

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化,；有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用,，在用SV-BHK、BALB-3T3,、CV－1,、FS-4細(xì)胞對(duì)細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中，熱滅活對(duì)胎牛血清的影響小于對(duì)小牛血清的影響,。

細(xì)胞株生長(zhǎng)與熱滅活

我們調(diào)查了熱滅活對(duì)胎牛血清以及對(duì)其中不同細(xì)胞株生長(zhǎng)能力的影響,。通過比較11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6個(gè)細(xì)胞株（HBAE,，MDBK,，Vero，成纖維細(xì)胞,，MRC-5）的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響,，三個(gè)細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響,，而只有兩個(gè)細(xì)胞株（Balb/3T3,，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善,。所以,，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有明顯的促進(jìn)作用,。

沉淀與熱滅活

在正常操作下,，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面的影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,。注意到這個(gè)現(xiàn)象之后，為了驗(yàn)證污染的存在,，或者促進(jìn)沉淀的溶解,，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟,，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出,，為了確信血清未被污染，進(jìn)行的鏡檢,，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn),，和革蘭氏染色試驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間和精力。

結(jié)論

總之,，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的,。很多場(chǎng)合下，熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng),，卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力,。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的,。另外,，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩,。我們建議,，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性,，確定滅活的適當(dāng)條件,；在滅活過程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè),，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作,。